http://www2.lv.psu.edu/jxm57/irp/prot.htm

https://www.thoughtco.com/how-to-write-a-lab-report-606052



1. Purpose: This is a formal statement which encompasses your hypothesis. It is a statement of what question you are trying to answer and what hypothesis you wish to test.

2. Materials: List all major items needed to carry out your experiment. This list need not be lengthy if the materials are already published, but it should include the essentials.

3. Methods: How will you set up your experiment? How many experimental groups will you have? How will you measure the effect you wish to study? How long will the experiment last? These and any other methods should be explicitly stated or referenced so that a reader has all the information they need to know to be able to repeat your experiment and verify your results.

4. Controls: Identify the relevant control(s) treatment. Think about the variable(s) you and your group are manipulating. Your control needs to be held under natural, or unmanipulated conditions, not affected by the tested variable.

5. Data Interpretation: What will be done with the data once it is collected? Data must be organized and summarized so that the scientist himself, and other researchers can determine if the hypothesis has been supported or negated. Results are usually shown in tables and graphs (figures). Statistic analyses are often made to compare experimented and controlled populations.

6. References: Any published works (journals, books, websites) that you cite in your protocol should be listed in the reference section so that anyone reading your protocol can look that work up if they desire. 


나중에 정리할꺼!


플라스미드 형질전환 관련. 여기에 유전자 기술 전반적인거 다 있다. 좋음
http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=16&page=2


[Vorbesprechung] 

- mon die mit 09:00 - 10:30

- don 15:00 - 16:30

- frei 10:30 12:00 

- alle tage (mon-don) 13:00-14:30 (-13.12) 다른 교수님

- 2,3 Terminblöcke für die Prüfung : mündlich


- Mineralüberschuss : 미네랄 과잉

- kontinuierliche Reizung durch ein pathogen : stimulation, 자극 (e Reizung)

- beliebig : randomly, arbitrary 임의적인, 제멋대로의

- Präfomierte Abwehrstrukturen : passive abwehr, 미리 형성됨 preform



- Phenole : 폴리페놀 형태로 식물에서 발견됨, ROS Detoxifikation, 

- Tannine : quantitative pflanzliche Sekundärstoffen. Alkaloide는 이와 반대로 qualitative Wirkstoff 인데 아마 Verdauung에 영향을 줘서 Pflanzenfresser 를 막는다고.  hydrolysis 된 페놀산 등. 물에 잘 녹고 수용액은 산성, ferric 과 Salz생성, 

- Saponine : saponin, Detoxifikation, Defensivstoffe gegen Pilzbefall, Insektenfraß. 토마토, 감자에서 이런 기작이 두드러짐 Steroidsaponine

- Defensine : basale Peptide, 세균, 곰팡이에 대한 살균활성. 신기하게 곰팡이에서 처음 발견됨

- Phytoalexinen : 미생물 침입이 있을 때 식물에서 합성, 축적되는 저분자의 항균성 물질 Bildung von Phytoalexinen

- Peptide 결합 : COOH 카르복실기에서 OH, 2HN 아미노기에서 H 가 빠지면서 물이 빠지고 결합하는 형태. 애당초 아미노산의 정의가 이 카르복실기와 아미노기를 동시에 지닌 화합물을 말함. 단백질에는 20종. 아미노산 기의 수에 따라 2-10개면 Oligopeptide, 10-50 이면 Polypeptide, 50 이상이면 단백질

- Chlorogensäure : 클로로겐산. Pflanzenfresser 방어작용, caffeic acid + quinic acid + easter 결합. 

- Quinone, Chinon : als Oxidationsprodukte von Aromaten, insbesondere von Phenolen, 벤젠고리 수소 2개가 산소 2개로 치환된 녀석들. p-벤조퀘논도 퀴논이라고 함

- Terpene : 천연물 약 60프로가 이 종류. 식물 간 혹은 동물 간 유인용 휘발성 신호분자, 또는 미생물 및 Pflanzenfresser 방어, 공격물질

- Auxine : Phytohormon, Biegung 을 유발. Phytohormone für Wachstumsregulation

- Gibbereliline : Phytohormon. Diterpene와 관련있음. Früchte, Blätter, Blüten 에서 생성되며 Geschlechtsdifferenzierung, Keimung 외 Wachstum 에도 영향을 준다

- Cytokinine : Phytohormon, 여러 작용. 생장 조절, 세포분열 촉진, 휴면타파, 노화억제, Gibbereline 과 함께 단백질 조절, 기공 개폐, 꽃 개화 등. ABA 는 닫게 만들고 이놈은 열고. 어린 종자, 과일엔 많다가 시간이 지나면 차츰 감소

- Ethylene : Phytohormon, C24. 아주 단순함. 메티오닌으로 시작하며 Reifung, Blütung

- Abszisinsäure ABA : Phytohormon, 낙엽 촉진, 수목 휴면형성 관여, 발아억제. 그 외에 수분스트레스 등 환경 스트레스 반응의 Signal

- cutin, wax : Zellwand, 큐틴은 각피질. 화학적 단일물질 아님. 지방산축적된 것이며 세포벽 외부에 발현되며 물, 기체 unpermeable (unpermeabel)

- Zellwand-Auflagerung : 세포벽 유지, bearing

- Abscissionslagen und Tylosen : 탈리. Auxine, Ethylene, ABA 에 의해서도 발생. 식물이 상처를 입었을 때 발생하는 조직.


- Botrytis cinerea : 잿빛 곰팡이병, noble rot, 

- Vertebrates : Wirbeltiere (반대 : Wirbellose)

- Drosophila : 초파리. 독어도 동일

- Trichome : Pflanzenhaar털. 식물체의 표피세포가 돌출되어 형성. 또는 사상체 (포자체가 실처럼)

- fold change : 배수 (2배수, 3배수...) 또는 FC 유전자 발현량을 두 조건에 대해 비교. 즉, Treatment / control.  

how many times bigger the mean expression value in group 2 is relative to that of group 1

http://blog.genoglobe.com/2017/10/fold-change.html

- Dimerisierung


[Herr Schell] - 일단 중요한 원리, 펙터간 인터렉션을 공부하고 그 다음 주요 실험들과 연계해본다


1. Krankheitskonzept

- 생물로 인한 인과관계를 규명하는건 실험하기 *präsentieren 매우 어렵다

- Gruppen 중요하다. 

2. 언제나 Ernteverluste 최대 요인은 Pathogen. das größte Verhältnis

3. 아시아는 유독 손실이 크다. 농약 마이 써야될듯

4. 나라별로 차이가 난다. 비용때문이라는데

5. Baumwollen 은 중국서 주로 하는데 유난히 Verluste 심하다

 - Poteintial : kalkulieren, alles kartiert, damit kann man Potential der Verluste einschätzen. 비교를 위해선 Potential 이 중요한 Parameter

6. 면적당 Ertrag 이 마이 늘었음을 알 수 있다

7. Zunahme der Bevölkerung 은 Entwicklungsländer 에 달려있음 을 알 수 있다

8. Typen : 1번 폴리와 연관지을 수 있음, tierische 는 여기 딱히 안나와있는듯

9. 식물-병원균 간 반응 schema

 1) keine pathogene Reaktion, sogar positive Wechselwirkung möglich

 2) sequestration?

 3) Phytopatho infestans 처럼 토마토, 감자에만 나타남 : Gen für Gen 

 4) schon angepasst mit Abwehrmechanismen, 

10. Pathogenerkennung : Oberflächenrezeptoren auf Zelle

 1) MAMP (PAMP) : spezifisch, Proteinkinase 와 인산화를 유발하여 반응이 진행 CNGC - cAMP - Ca2+, 

 2) DAMP : ähnliche Rezeptoren mit MAMP, 

 3) Effectors : 완전히 특정Spezies 에 angepasst. interagieren mit verscidenen Signalleitung. Kinase 같은 방어기제와 직접적으로 반응하여 효과적으로 식물의 디펜스를 무너뜨린다

 - 방어 프로틴이 녀석을 디텍팅할 수 있으면 효과적으로 방어된다

11. minimal motif 는 spezifische Peptide 임니다. Prinzip 이다

 - Eu-Tu : intercellular

 - NLPs : große Rolle bei Pathogen

 - gp92 : Anhefung

 - Lipid : 세포벽 바깥에 Lipid auslösen

12. PAMP : 

 - PTI :  pattern triggerd immunity

 - ETS : 상대적으로 꽤 복잡한 과정. Krankheit auflösen

 - ETI : Abwehrreaktion

13. 아까 쉐마와 PAMP반응의 용어 매치 Terminologie

14. avr (avirulenz GEn) nicht da ist ... 항상 K, 

 -  왜 r 에서도 발생하지? nicht funktionelles 인데? Funktion의 의미는?

16. 

 1) Präfomierte Abwehrstrukturen : passive abwehr

 2) HR : lokale Neklosen 을 의미. 

17. biochemisch

18. Angriffstrategien

 2) Chemisch

  - Enzyme

 3) Wachstumsregulation : 이거 골때린다.. Hormone

19. 세포벽 Schema :

20. Kutikula : Schutzfilm der Oberfläsche von Pfzelle 

 - 식물마다 unterschiedlich

21. Kutikula Bestandteil : Acyllipide, 

22. 계속 가지치기 되니까 schwer zu zerknaken

24. Haustorium 형태를 B Abbildung 이 보여준다.

 - 하우스토리움 찬양중. hohe Druck, 

25. 식물은 Pilze 를 erkennen해서 Cutin 붙이고, 반대로 Pilze는 Cutin erkannt - 서로 인식 Erkennung

26. 중요한 부분은 Suberin 이라 되어있는 lang kettige lipide...

28. Zellwand-Struktur

29. Fibril zusammengelagert sind.

31. Cellulose 가 분해되는 과정. 각 과정에서 verschidene Enzyme betieligt

34. Pektin : Polygalactoren Säure

36. 이 사진은 세균이 낸 효소에 의해 펙틴 층이 데미지입은 사진

37. Ligninpolymer: Suberin 이랑 잘 verbunden. Strukturfinktion한다 당연히 Bacteria Enzyme 에 공격받는 대상

38. Conidien keimen - 멜라닌 in 아프레소리움 쌓인다 - 높은 Druck - eindringen

39. Korkschichten : 

40. 들어간 다음에는 각 Patogen 에 따라 다른 전략발휘 - Appresorium usw

41. 공격 수단??

42. 

- 바이러스, 박테리아 : 

43. 예시

Antimikrobiell : Glykoalkaloide, Solanidin (Toxisch)

44. 다른 예시 : Wirt 마다 다양하다. 

 - Trichome : 토마토도 verschidene Trichome 트맇효메


[3. Abwehr] - 쭉 나열하고 주요 예시를 든다

1. 2번째 로칼 에서 Abwehrproteine - PRP Pathogen related Protein 

2. Phytoalexine : teilweise konstitutiv expremiert, damals nicht entdeckt

4. 퓨토알렉시네 종류도 여러가지여. sehr große Spektrum

5. Synthese : 쿠마릭엑시드, 페닐알라닌, Stilbenes, Terpene (mono, di, tri-), 감자에 중요한건 Chlorogenic acid

 - 페타질리에 나타난 로칼 Akkumulation von Phytoalexinen이다ㅏ. 국소적으로 쌓이고 분비됨을 보여줌

아래는 퓨토알렉시네 종류들

7. Phenylpropanstoffwechsel : 쿠마린이 된다우

8. Furanocoumarin : Modifizierung der Molekül hat biologischen Sinn, für Detoxification. BMT 를 통해 R 기가 붙는게 그 예시

9. 사진 : BMT 의 상단에 원형 같이 뚫려있어서 위협에 잘 노출되는 곳은 konstitutiv 하게 sekretiert

10. Phenylpropanstoffwechsel :  CoA Co Enzyme A 란 의미

12. Medicarpin : 

15. Camalexin : 시스테인이 붙는다 Konjugat

16. Resveratrol : 제일 짧은 작용기라는 듯. 

17. transgene 를 통해 면역력을 확보! Resistenzerhöhung

18. 3번째 그래프를 통해 Resveratrol 과 Anfälligkeit 가 상보적 관계임을 보여줌. 더 많을수록 덜 anfällig

19. Defensin : universeller Abwehrmechanismen. 작은 프로틴, 다른 프로틴과 ähnlichkeit 가 없고 spezifisch

 - Lipid-trassfer Protein

 - Endoproteinase : Tomato 에 연관이 있는 녀석. 다음 폴리의 P69B

21. Antikörper Herstellung 이 Adaptive Immunsystem 의 예씨 : 중요한 폴리

 - PAMP 는 im Prinzip 모든 셀이 가능하다.

 - 공격의 대상이 아주 확실하다. 

22. Flagellin 이 그 대표적 예시. 

23. Vertebrates, Drosophila 로 보는 PAMPs 예시

24. 인간을 대상으로 여러 박테리아에 대한 Abwehr Regulation 테스트

 - 사람에게도 있다.. 이말인가?

30. 어떻게 무엇이 minimales Elicitormotif 인지 알지?

31. 이 폴리가 PAMP 에서 생물학적으로 가장 중요한 내용임

 - Transglutaminase 

32. 수많은 Phytophthora 종들에서 PEP-12 (Transglutaminase) vorhanden

36. 또 하나의 주요한 minimal Motif - Oligoglucosides

38. 어디에 쌓이는지 Lokalisation 을 통해 어디 Abwehr에 유효한지 알 수 있다ㅏ. 이 경우, Wurzel 

43. transformieren 한 게 정해져있다. 이 경우 befall

47. Flagellin 요놈도 꽤 중요하다.

49. jm-cyto : junction domain

50. Korezeptor ist für weiter Reaktion verantwortlich

53. 다소 알기쉬운 개요

55. Lokal von FLS2 mit GFP

 - Energie Verschwendung 을 막기 위해 Abbau mechanismus 도 달려있음

56. eindeutig PTI (PAMP Trigered Immunity) 

 - 비용이 발생한다는데, 얼마나?


- Tomatinase : Tomatin, Lycopersicin. a glycoalkaloid, found in the stems and leaves of tomato plants, and in the fruits at much lower concentration

- Blumeria graminis hordei : Gerste.

- DAB : 

- oberhalb des oxidative burst

- in der Gegenwart von

- Pseudomonas syringae

- lokal 한 konstitutiv aktiv Form

- scavenging system : 


[Abwehr 3]


12. Septoria lycopersici

13. Tomatinase 의 영향 

14. Phytophthora infestans : Zellwand-Auflagerung, Zelltod, 압게슈테어벤, 스토마타가 닫힘. 굉장히 lokale Reaktion von Zelltod

15. 이건 일종의 programmierter Zelltod. 

16. wichtige Bestandteil der Reaktion : ROS. W2A 는 컨트롤 그룹. 

 - Pep : Pump

 - DAB : Farbstoff

17. 아주 lokale Reaktion 임을 확연히 보여줌

18. Vesicle 도 염색된 걸 보면서 메커니즘을 확인 할 수 있다

19,. Zellkern 이 어떻다고?

20. 아주 빠른 반응이라는 걸 알 수 있다

21. ROS 반응을 알기 위해 우선 알아야 할 것은 frühere Reaktion : Ca Signal

 - Aequorea 이용 : 에쿠오린

 - coelenterazine : Co-Substrat. 전구체인듯?

22. 이걸로 Ca2+ Quantification : 

23. FLG22 라는 채널과 flg22 프로틴이 

 - La2+, d3+ 는 칼슘과 크기가 비슷해서 채널을 막는다. 즉, 이걸 통해 칼슘이 전구체임을 확인한 것이다

 - 순서는 왼쪽부터 이어짐

24. 순서 : DPI - DDC - 

 - Catalase : Entgiftungsreaktion

 - andere Abwehrreaktion : mit Peroxidase - 파토젠이 세포벽을 공격하는 엔자임을 내는데 여기에 대항해 세포벽을 지키는 Abwehr로써 활용. 즉 안티 공격 엔자임 정도

26. EF hand : Ca2+ Bindungsprotein (Protein Complex)

27. 어떻게 ROS 가 NADPH-Oxidase에 의해 Reguliert 되나여

- Rboh : respiratory ...

- Rac Protein

- 만약 칼슘 농도가 계속 올라가면 마지막 단계로 들어간다

28. Atrvoh oxidase 의 역할 실험

 - Pseudomonas syringae

29. 이 CDPK5 Abwehrmechanismen 은 최소한 이 2개 파토젠에 유효한 전략이다

 - PVS3 프로모터에 의해 발동되는 이 반응은 innerhalb paar Stunden 인 빠른 반응이며 굉장히 국소적 lokal 한 konstitutiv aktiv Form.

 - Line-7 의 마지막 사진을 보면 철저히 로칼적으로 반응하여 inhibitiert

31. Nekrotroph Pathogen 인 솔라니에 대해 이런 로칼 반응은 효과적으로 반응한다.. 일거다 아마

33. ROS 의 다른 역할 : Tyrosin

34. ROS 의 다른 역할 2: Signaltransduktion 예전에 했던 ROS response. 

35. NO : Stick-Oxid. 우리 몸의 주요한 Nerven Signal 이기도 하다.

36, L 어쩌고는 NO inhibitor

37. 이걸 통해 Abwehr 에 NO 가 주요한 역할임을 알 수 있다우

39. NO Abbaumechanism : NO는 reaktiv 한 녀석이니까. Protein-Nitrosylierung

- NPR : No PR (Abwehr Protein). 여기에  NO 가 붙어서 S 다리를 활성화 시키면 핵으로 들어가서 방어 프로틴을 transcription 하게 된다. 일종의 트리거인 듯. 

40. 전체 총정리 : SA 는 intercellular 가 아닌 다른 생물에게로의 Signalleitung을 담당하기도 한다.


[Abwehr 4] - 계속 PAMP 예시들 다룬다. 계속 실험들을 통해 무엇이 무엇에 대해 원인, 리셉터 등 을 다룸

1. Enlongation factor Tu(EF-Tu) 

2. 2번째 그래프를 통해 Rezeptor spezifisch 함을 확인할 수 있음

- fold change after 60 min?

- 왜 인펙션 전 후 가 거의 같지..?

4. elf18 은 펩티드 minimal motif, 

5. 2번째 그림에서 박테리아를 염색했으며 efr-1 뮤턴트가 확실히 empfindlich 함을 알 수 있다

6. EFR-1 Übertragung zu anderer PFlanzen (Brassicae말고 Nicotina

- 아래 그래프가 보여주듯, typische Reaktion als Abwehr 보여줌

8. Xylanase  gegen surface-exposed pentapeptide 

9. 토마토

10. Zipper Domain 은 Protein-Protein Interaktion 의 전형적인 녀석

 - Endocytosesignal : Ligand Verbindung 어쩌고

11. Xylanase 에 대해 Silencing 작용할 하는 RNAi 있다

 - 컨트롤은 펩티트 발랐을 때 네크로제 반응이 있지만 3, 4번은 사일런싱되어 반응이 없다

12. Complex

12. 반응을 위해선 우선 Bindung 그다음 Rezeptor induziert 되어야 풀 리액션 발동

14, Kinase 설명

16. NLP und nlp20

17. RLP3 auf Solanaceen Übertragung : 갖다붙이니까 효과있는 녀석들

18. 18, 19는 각각 다른 방법으로 BAK1-SOBIR complex 테스트 결과를 보여줌

 - 

20. Lipopo...

21. 이번껀 Ca2+ Signal

24. 384개 뮤턴트한 결과 2개가 반응이 없엇다. 그걸 분석해서 어떤 녀석이 이 반응 담당인지 확인

25. 분석결과 : S-Domain receptor kinase 가 LPS recognition verantwortlich 확인

26. S Domain 스트럭쳐 : 아주 복잡하다. 

 - GlcN 만 좀 특정한데

28. MPK : Protein Kinase, 

31. Säuertier 에게도 있는데 메커니즘은 매우 다르다

 - Recognition 에 한단계 더 있거나 아니면 직접적으로 인식되는데 식물은 LPS 가 LORE에 붙으면 바로 발동

32. Chitin - Specific oligosaccharides 매우 중요

33. 이번엔 쌀이다

 - a 는 DNA Sequenze, b 는 transkirptierte Sequenze (RNA)

35. 이번에도 RNAi 로 사일런싱해서 테스트

36. 아라비돕시스에는 Rice 와 달랐다!

 - 우선 LysM 이 2개가 아닌 3개, 

 - 최소 4개 이상의 키틴 Glyco NA Pe 있어야 Verbindung 된다

38. Dimerisierung 이 Auslösung der Abwehrantwort 의 핵심

40. 쌀의 경우 OsCERK1 

 - 근데 키틴 시그날을 위해선 필요하나 키틴 Receptor 는 아니다

41. 그럼 왜 필요함? 그 설명. 

- 키틴은 사실 CEBIO 에 갖다 붙는다구. 하지만 아라비돕시스의 LYM과 같이 CEBIP는 kinase 가 없다. 

- PGN : Peptido Glucan 세균에 많이 포함된 물질. 

- 꽤 복잡하다. 쌀의 경우 PGN bindung은 아직 다 규명되지 않음

43. LysM Protein 은 여러군데 쓰인다우. 

44. DAMP 는 또 다른거임  Damage-associated molecular pattern

47. 총정리

48. PRR?

49. 점유하는 병원균-호스트의 사이즈에 따른 분류

 - 이걸 먼저 보고 하나씩 보는게 어덜


https://plantmethods.biomedcentral.com/articles/10.1186/1746-4811-2-19

-  Cladosporium fluvum 




[Abwehr6]

1. 복습

- 3번째껀 Gen für Gen, 아주 효과적이므로 농업, 육종 등에 많이 활용됨

2. Effektorn 은 구조적으로나 기능적으로 다양다양

3.  T3SS (Type 3 Seckretion System) 이 제일 중요하다!!!

- Flagellum : PAMP detektiert, 

4. TTSS (T3SS) : 

- 아래 그림에서 hrp (hypersensitive response) 끊으면 한큐에 안펠리히,

- hrc 는 컨저브, hpa 는 콤포넨트

- 이 모든 단백질 컴플렉스가 위 그림에서 볼 수 있듯 TTSS 를 이루고 있다.

- 앞 페이지의 다른 분비 단백질들은 Apoplast 로 분비분비

5. TTSS 가 식물, 박테리아 양방에서 어떻게 작용하는지 개요 

- macrophase : 주요한 방어기작, 

6. 대부분의 Organism 은 Protease 이다

- Target : RIN4 호스트 인식과 관련

- XopD : SUMO protease

10. Stomata 로 들어가는 녀석

11. 스토마타ㄴ는 2개의 Schließzellenㄹ ㅗ 이뤄지고 

- sehr responsiv auf Umweltfaktoren

- 예를 들어 CO2, Wasserstatus, Licht...

- ABA

12. 3번째 그래프에 따르면 코로나틴이 유도하는 반응인데 초기에는 스토마타가 닫혔다가 이걸 다시 열도록 유도한다

- 5번째 그래프 : E Coli 는 감염시켜봐도 스토마타가 다시 열리진 않는다. 즉, 코로나틴 특유의 기작

13. MES Buffer 등장

14. SA salicylsäure 가 결국 스토마타 여닫에 주요 펙터

- ??

15. NO 

-L-NNA 는 다시 NO 처리 해줌

16. 코로나틴은 analogue von Phytotoxin Jasmonat 

- hrcC ...

17. 결과적으로 코로나틴은 스토마타가 닫히는걸 막는다

18. 코로나틴을 인식하고 잡는 과정인듯

19. DC3000 은 코로나틴을 말한다

20. OST 는 ABA, SA abhängige Kinase

23. XopD

-SUMO 는 Proteinabbau beteiligt.

- ubiquin ähnlisches...

- 단백질 뿐 아니라 transcripionsfaktor 를 분해해서 비활성화시키기도 한다

24. 아 헷갈린다...

25. AvrBs3, PthA 의 타겟은 DNA bestandteil이다

27. 전형적은 Tal Effektoral Struktur : 

28. C 그래프 : 박테리아, 즉 Effector Protein 과 Bs3 가 딱 있으면 디펜스. 여러 Variabel 을 다다다 테스트해봤음

29. Repeat Domain (Wiederholungs Domanä) 

32. Tal Effektoren : 계속 설명

34. Rezeptor 의 유형 Klasse

- NB-LRR 많은 유형이 여기 포함되며, 

36. RIN : PM 에 위치하며 수많은 Resistenz Prozess 에 참여하는 단백질

39. 또 다른 흥미로운 예시 

- AvrRpt2 Cysteine Protease

40. Cyclophilins : 와 복잡하다. 엄청 꼬여있다...

42. AvrRpt2 와 MPK activation

52. PBS : Abwehrprozess 참여하는 친구 중 하나

54. 머리 깨진다...

JAZ : Jasmonat 는 식물호르몬이다! In Arabidopsis thaliana, JASMONATE ZIM-DOMAIN (JAZ) proteins are negative regulators of JA signalling

58. Oomyceten 는 어떤 이펙터를 갖고 있는가 : 오랫만에 나왓다!

61. 예시로, Cladosporium fluvum 

68. Zusammenfassung 왕정리!

69. 우와 예시까지 전부 왕정리. 아마 요걸 그릴 수 있을 수 잇는 정도가 되야될 듯


- r Speichel : 

- derivative : 

- anlocken : attract

- Maiszünsler 




[Abwehr 8]

1. vielfältige Disziplin in Herbiboren Forschung

- behavioral ecology : direkte Wechselwirkung

- Population : 

- community : alle player einbezogen sozusagen

2. Scale

3. Reaktion 에는 Jasmonat, Derivaten wichtig rolle

- verschieden sorte Jasmonat gemessen : A-E 는 증가되었다가 Vakuole 에 abgelagert. 

4. Jasmonat ist Signal

- NO, ROS, ABA, 에틸렌, 시스테민 *원리설명함)

- FACs, OGAs : 알려는져있으나 원리는 잘 모름

 - 오른쪽은 어떤 과정을 거쳐 JA 가 되고 Ja가 다른 녀석과 konjugat (mit Me, LLe..) 되는지 볼 수 있다

5. Herbivoren 의 무엇이 eclicitor 인가여

6. 이 반응은 그전까지 봐왔던 반응과 유사함여. 

- 우리가 봐야할 부분은 오른쪽 부분 : JA-lle, JAZ, 등 

7. Prosystemin : systemin 이란 이름은 chemische Signal 역할 때문이라는 듯

8. 토마토 예시 : 

- Strahlung : 리간드에 마킹하고 테스트해보니 

- 오른쪽 분자가 시그날 케치?

9. 왼쪽은 각종 Wundreaktion Transkription DNA, acx1 은 JA 담당 스위치가 꺼진 상태!

- THW는 허비보어 saliva같은건가?

- E : 방어기작이 작동함으로써 Verdauung 을 방해해서 애들이 사이즈가 작아진다. 뮤턴트는 애들 사이즈가 와방 큼

- 곤충 먹이를 찾을 때 이런 기작을 완전히 꺼트린다면?

11. 시스널링과 생산을 두고 지엽적, 전체적 연관성을 추적

- A : scion은 시스템 반응, stock 은 로컬,

- B : spr 로 실험하면 야스모나트 생성 뮤탄트인데, 생성이 안되니까 아주 그냥 반응이 없다우. 해석이 좀 어렵다

12. 여기서 elF4A는 뭐임?

- 오른쪽 그림 PI : Protease Inhibitoren

 13. ProSys : Prosystemin 

- SR160 레젭토어가 인식 - 타겟 유전자 anschalten - 플로엠으로 transportiert - 시스템적 반응

14.  아래쪽 에서 아르기닌이 변형되는 harnstoff 는 toxisch!

15. 

- C 는 WT 에 의해서 먹힌거. 엉망진창

- D 는 over expressor 된걸로 훨씬 피해가 덜하다.

- 먹힌 물질을 분석해봐도 오버엑스프레서는 Arginase 가 많이 발견된다.

16. Terpenoids : 잎이 손상되면 이 volatile Terpenoids 가 freigesetzt. 

17. HIPV 는 위의 flüchtige Substanz 포함된건데 이게 있는 환경에서는 Protease inhibitore 가 빨리 생성된다. 

- 이건 Luft로 나가는 거니까 한 식물이 공격받으면 주변으로 이 물질을 내뿜어서 다른 녀석들도 Abwehr process (PI) 을 준비시킨다. 그럼 빨리 방어할 수 있겠지요?

18. 그래프는 휘발성 물질 측정한것

- 맨아래의 Caryonphyllen 역시 터페노이드 한 종류. Hauptsubstanz bei Mais

19. Auswahl Experiment 진행함

- EPN : Käfer

- ㄴ네마토덴은 WCR 에 공격받은 쪽으로 가려고 한다, 콘트롤은 아무것도 없는 곳.

- 이 실험의 마이스는 유럽, 아시아종

20. 맨 앞의 그지같은 반응은 아메리카 종인데 카로필렌 터페노이드 생성을 못한다

- 다들 연관성을 보여주는데 터페노이드 못만드니까 네마토덴에 더 많이 물어뜯김.

21. Caryophyllen 

22. Anlockung : attract. 

- schönes Beispiel für indirekte Abwehr

- 이 카로필렌을 사서 땅에 뿌리면 농약처럼 효과가 있다고.

23. 마리엔케퍼는 착하답니다

26. Insektizide : keine Pflanzen pathogene, 바실러스는 오직 특정 insekten에만 toxisch

- Bt-Toxine 은 사람에겐 해가 없고 그냥 단백질처럼 분해되니까 이걸 식물에다가 발현시켰다!

27. Toxicität 원리 : 

- 이 Bt 톡신 가지는 식물

28. 오오

29. Baumwolle 는 농약을 아주 많이 치는 종이라서 이 기술로 인해 돈 왕 아깜

- Mykotoxin...

30. Fumonisin : tixisch. 확실히 Bt Mais 강점을 가진다

31. 단순히 돈만 되는게 아니라 Insektizide 를 적게 썼기에 다른 곤충피해도 적어서 생태적으로 좋다 이말이야

32. Resistenzentwicklung 은 다른 Bt Toxin 도입을 생각 중

- 왜 Resistenz 가 잘 안생기냐 를 본다면, 아마 박테리아에 비해 Bt Mais는 Toxine 을 와방 쏟아내기 때문인듯.

33. 벌레가 왔다갔다 못하니까 그것도 도 하나의 주요한 효과

34. Virus : 

36. Weisse Fliegen 은 Gewächshaus 에 큰 문제

37. Übertragung : 감자의 경우 vegetative Vermehrung 하는 녀석이라 이 상황에 특히 약하다. 

39. 파파야 바이러스 : 온갖 단백질 슝슝

- Mungbean .. mosaic...

40. TMV genom : Movement protein, Coat  Protein

41. 중간에 보이는 RdRp, MP, CP 다 TMV infection에 핵심적인 역할이다

42. GFP 로 발현 관찰 > 플로엠타고 내려갓다가 물관으로 올라가서 개판

44. siRNA : RISC transportiert siRNA - mRNA abgebaut

45. 식물의 방어기작은 바이러스의 RNA를 리보좀으로 확인해서 Dicer 로 2 strand 로 쪼갠 다음 RISC 로 abbauen 한다. 그러면, 발현되지 못한다 이말이야. 

- 이 모든건 바이러스 서프레스 프로틴이 인식해주셔야함

47. 형태를 바꿔서 Plasmodesmata 통과 못하게 함

50. Papaya 는 그 이점이 극단적으로 발생

51. PRSV 가 휩쓸었을 때 난리도 아니었음, 

54. 확실히 바뀐 뒤로 효과가 잘 나는구나











[Herr Daising]


- s Warmlaufen : 아마 warm up

- Hygromycin resistence gene Cassette : for Vector construction and Selection. 식물 변형을 위한 툴. Hydromycin-B 가 사용되는데 이건 Antibiotic. 기작은 stabilizing tRNA-ribosomal acceptor site, so that Inhibition of Protein synthesis. Resistance Gene 은 Kinase 인데 Hygromycin B 를 phosphoryration 해서 inactivating. 식물이 제대로 transmormation 됐는지 확인하고자 할 때 쓰는데 non-transformed calli 는  

- Transformation of plant with Agrobacterium :  Immersion of Arabidopsis inflorescences in a suspension of Agrobacterium, with surfactant, was sufficient to generate transformed seed. 셀렉션은 kanamycin, Hygromycin B 같은 걸로 진행. 

- immersion : (액체에) 담그기

- suspension of agrobacterium with surfactant :  현탁액(부유액) + 계면활성제

- homologe Integration und ektopische : 

- Transformation of fungi (Aspergillus...) : 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21468206


- Candida albicans : 면역력 약하면 invasiv werden 

Deformismus : 계속 설명. 언급된 필째 중 어떤 녀석이 이건가? ovale conidien

- Neurospora-Isolaten : Model Pilze. 자낭균류 Ascomycetes  붉은빵곰팡이속. 핵, 미토콘드리아, 소포체 ER, 이 있다. 세포막, 세포벽. 유전학적 실험재료로 쓴다고. red bread mould 라고도 함

- Regidifizierung : Verfestigung




Einführung

1. 기본적으로 Infektionsstruktur 는 Appresorium

 - 80 bar : höhe Druck

 - CWDE : 

 - Alternaria alternata : Nekrotroph 의 예시. 토마토, 감자. Toxin

 - Flagelin : immer gleich produktieren, Variabilität, Chitin Erkennung, 

 - Signal 이 나와서 레쩹터에 붙으면 Abwehr 발동 

 - Haustorium : Mehltau, 등 absolute angewiesen auf lebende Gewebe

 - PHytoalekxin : 퓨토알렉신, 뭔가 

 - Effektoren : Verteidigungsmechanismus von Pilze, Rezeptor inhibitet

 - Toxine : 식물을 그냥 죽여서 바로 영양화. 근데 nur Nekrotroph

2. Pilzes는 식물로부터 Kohlehydrate 냠냠

 - Zellwandfragmente 

 - Zuckersensing : SNF kinase Sucrose none Fromenting ? 이녀석은 CRE1, HEFE에서 발견된 현상인데 아마 다른 필제도 이럴것으로 예쌍한다, 이건 필째의 세포벽 Abbau Enzyme Regulation 메카니즘 설명. 너무 많이 sekretiert안하게. 식물의 탄수화물을 감지해서 한다는 얘기인듯

 - Siderophore : hoch Fe Affinität. 흥미로운건 Peptide 인데 리보좀에서 생성되는 Peptide 가 아닌 sekundäre Exkretion, 

 - 필째가 철을 훕수하는 기작

3. 각 Organ은 DNA를 갖고 Dogma에 따라 DNA - RNA - Protein 과정으로 살아감

 - Endosymbiose Hypothese : 모른다는건 있을 수 엄음....

4. 알파헬릭스, 베타 쉿 의 특징은?

5. DNA : 5. Streich, 3. Streich, PCR 을 이해하기 위해 이 화학적 구조를 꼭 알아야해여

7. Denaturierung und Renaturierung : 분해해도 (끊이거나 하면) Basen 끼리 다시 붙는다, 

 - aufschmelzen : Korellation을 보여준다. C,G가 많을 수록 Schmelztemperatur 가 올라가는 경향

 - 온도가 중요한 이유는 Denaturation 은 온도가 올라가면 (적절한 녹는점) 분해되고 다시 내려가면 지들끼리 붙기때문

 - 디엔에이 분석에 중요한 정보

8. konstitutive Gene : Glucose kinase, Hexo kinase. 항상 필요한것 nicht je nach Umweltbedingung, Alch

 - Adaptiere Synthese

 - Intron : 

9. Zehn hoch Acht Basen paar : 

10. 초파리의 13,600 개 유전자가 사실상 필째에게 한계 숫자

 - 사람은 25,000, 아라비돕시스는 27,000 (너무 안많ㅇㅏ서 좋다우!), 

 - 겐이 하플로이드면 아주 큰 큰 장점 : 필째가 대표적 예시인데, 하플로이드 겐은 껐다 킴으로써 바로 활성, 영향을 알 수 있다

 - 하플로이드 겐이 도대체 문가요?

10. wie sichtbar machen? : DNA 너무 기니까 fragmentiert, 그리고  Agarose를 통해 크기별 sortieren.

 - 어디에 내 Zielbasen 이 있는지 확인 Isolat

 - 이 작업이 왜 중요하냐? 어느 랩마다 뮤턴트를 만들어낼 때 이러한 위치 확인은 항상 중요

11. 5 Strich 엔데와 3 슈트리히 엔데

 - glatte : keine Überladung haben... 정확히 어떤 역할?

 - Basenpaarschneider Fragmente : 아까 쪼개던 걸 통해 우리가 원하는 Basen 이 어떤 크기의 Fragmente 에 들어있는지 알아내야한다?

13. nitrocellulos paper : filter

 - 플라스틱 벡에 넣어서 열을 준다 - Denaturierung. 그리고 빨간 점은 labelled Probe : 원하는 Basen verbunden (Antikörper, Antigen)

 - wie viele Kopienzahl eines Gens 요게 현재 핵심. 언제 어디에 들어있능가

 - 어떻게 겐을 스위치하나?? : 원하는 겐 좌우에 5-end, 3-end 가진 곁다리 겐을 PCR 해서 그 사이에 스위치할 Gen 을 위치시켜서 붙인다. 

 - 붙일 녀석은 기존 겐보다 길다. 그렇기 때문에 서던블롯을 하면, 그리고 염색해서 나타내면 성공적으로 스위치된 경우 크게 나타난다.

 - 염색은 어디에 하나?

 - Resistenz Kassete

 - Hygromyzin ? zufällig 하게 다른 위치에 달라붙은 경우인듯 extopische Transformanten ㅇ

diese Mutante ist gelungen 성공했다는 뜻이죠

14. C23 으로 보면 

16. muss ein Primer design, der perfekt verbindet mit zielgen

17. wie Primer ableiten? 모든 프로틴은 메티오닌부터 시작한다. 왜?

 - 

18. Interkalation in die DNA. 이 에티디움브로미드는 염색시키는 건데  왕 독성. 디엔에이에 달라붙어서 그런가

20. 노던블롯도 프린찝은 서던과 같음

 - 프로베를 갖다 붙이는 걸 Hybridisierung 이라 캄

21. 18 h p.i (Post Iniculaiton )

22. RNA확인은 DNA 와 마찬가지로 PCR, 근데 RT-PCR

23. 아까와 마찬가지로 RT-PCR, PCR  단점은 Semi-quantitativ 하다는 것.

24. 아까랑 같은데 Fluore Probe 를 붙여서 im Lauf der Transkription 반짝반빡

 - Zyklenzahl을 통해 원하는 종, 생물의 DNA, RNA 를 딱 bestimmen kann. 

25. 흐음...

26. Mäusen, Kaninchen 등에서 Antikörper 만듦.

 - SDS PAGE 원리 설명 : elektroblotting 할 때 Luftblasen 조심

 - 왜 sekundäre 항체? Preiswert 또한 AP 를 바꾸면 Sensitivität erhöhen kann, 

28. Kaninchen은 상대적으로 필쩨같은 거에 노출되지 않은 상태로 자란다. 그래서 여러가지 

 - 웨스턴 블롯 원리 좀 더 정리해놓을 것, 아직 2중 항체 이해가 안됨

29. 이 Selektionsprinzip을 간단히 설명하라

 - Schlüsselwort : Plasmid, Transformieren, Reportergene, 

30. GUS : Wunderbar. aktiv oder nicht aktiv. 발현되면  Pilze 는 죽는다 diese Pilze umbiringen

31. GFP system aus Aequoria victoria : 발현되더라도 Pilze nicht umbringen

 - Melanin 을 생성하는데 오직 Melanin 만드는 경우에만 빛이 남. 다른 사진들을 보면 안타나나지만 마지막 휴페는 빛이 난다. 즉, 멜라니지어트

32. Beta Glucan Syntase GLS1

 - 유전자에 붙이는 게 아니라 단백질에 붙이면 언제, 어디서 subzelluar Lokalisierung 확인가능

 - 빨간건 멤브란 파브스터프. 즉 두개를 다 비교하면 이 단백질이 오직 apikale Spitze 에 모여서 Spitzewachstum 에 기여함 을 알 수 있다


[1. Mutagenese und Klonierung von Genen]

Zufallsmutagenese - Transformanten untersuchung - 

1. 랜덤으로 뮤탄트를 만들어 관찰 : 단점은 겐이 마킹이 안되있기에 Identifikation 어려우 

- 그래서 Tagging (Markierung) : Hygromycin Casette ???

- heterologe : konventional 은 뮤턴트를 많이 못만든다. 반면 REMI 는 höhe Grad 로 생성가능

- homologe : 둘다 아그로박테리움 이용 가능

2. Pathogenität - qualitativ (Ja, Nein), Virulenz - quantitativ (1,2,3..)

 - Transformation 된걸 일단 넣는다. - 하지만 랜덤이다 in die Zelle hinein. 제대로 잘 들어가있으면 아래와 같이 한놈은 아주 튼튼

 - 이걸 통해 구분 가능 : 어떤 겐이 Pathogenität gen (첫번째 사진) 또는 virulenze Gene (다른 4개. 그건 정도의 차이가 있지만 상해있음)

 - 첫번째껀 WT

 - 파토게니텟을 결정하는 Gene 을 찾는 것이 Erfolg - 왜냐하면 아주 감염을 시작하냐 마냐의 큰 차이

3. 파토게니텟 찾았으면 Retrict enzyme으로 쪼갠다. 

 - 파란 선이 Restriktionsenzym : 랜덤으로 쪼개서 verdünnt (너무 농도가 높으면 다시 뭉친다) - 그걸 E-coli 에 다시 심는다

4. REMI : Restriction Enzyme-Mediated DNA Integration

 - 근데 이렇게 자르면 원하는 위치 말고 달느 곳이 잘려서 Vektor 로 인한 현상이 아닌 DNA Verlust 때문일 수도 있다. 

 - REMI 의 Markierungseffizient는 약 50% 정도다. 나머지는 다른 곳이 wo anders kann dafür verantwortlich 

 - 이 난리의 원인은 Sequenzing 이 예전에는 10,000 정도. 지금은 1/10 왕 싸졌다

5. 이건 optimal 게임

6 - 16 순서를 바꿔서 함

없다

17. 아재가 제일 좋아하는 필째 Magnaporthe grisea 근데 새로운 이름은 Magnaporthe oryzae

 - Biotroph 에서 뭘 끄면 Nekrotroph 가 된다.

 - Appresorum 만듬. 

 - 오른쪽 표 : REMI 로 처래했을 때 발견된 파토게니텟 뮤탄트 수.

18. 이 표가 설명하는건 휴고뮤찐 카셋 레지스텐즈 한 녀석은 오직 인터그레타찌온 된 녀석만 보여준다는 거슬

 - 왼쪽 표 확인 : 위에 있는 녀석은 제대로 코플룽, Integretation된 녀석

 - 표 아래의 녀석은 잘못 잘려서 DNA Verluste 로 인한 녀석이란 거슬

19. pth : pathogenecity 

- pth3-10 은 virulenz 인데 사실 Pathogenität  말고는 씹히는 경향

 - 교수 생각에는 안좋은 흐름이란다. Missverhältnis 라고

- 오직 팔기 위한 상품성을 위한 트렌드라고...

20. 하는 중

21. pth3 가 교수입장에서 흥미로웠다고 : 히스티딘 단백질 생산이 필째 에서 식물로 넘어가는 어쩌고

22, 23 안함

24. 히스티딘 단백질 설명

6. 아그로박테리아 원리 설명

7. 저 부분이 식물로 슥 들어가서 옥신, 사이토키닌, 오핀 등을 

 - 교짱 말로는, 핵도 없는 녀석이 어케 알고 식물의 핵을 표적으로 자신의 유전물질을 갖다 붙이는게 sensational하다고.

8. vir Region 은 버리고 오직 작은 T-DNA만 식물로 삭

9. Acetosyringone : 식물이 secretion 하는 물질이며 T - DNA 를 식물로 넣기전에 박테리아가 식물임을 (즉 타겟임을) 인식케 하는 Signal 물질이다. 

- danach T-DNA transfer zu machen

- 4개가 발생한 거면 나중에 Ausschaltung 할 때 어느걸 해야할 지 힘들다. 서던블랏...

10. 이 방법으로 파토게니텟, 비룰렌쯔를 효과적으로 definieren 할 수 있다

11. 설명함

12. germination - Appresorium - Melanisation - penetration

13. 나름 놀라운 거라는데 Allantoicase 는 avirulenz 한 녀석거라서

14. 설명함

15. 왜 Allantoicase 가 어째서 이런 반응에 중요한지 여기서 설명됨

 - 필째 반응 초기에 여차저차해서 알란토이케이즈를 통해 암모늄이 생성된다고. 

 - Purin 은 N 을 많이 함유하고 있음, 

 - ein Beispiel für Zufallsmutagenese

16. 논문이 추가된 폴리 von Chou

 - enorme Daten 강조함 ㅋㅋㅋ . 마스터 당 15-20개 

 - gene density : wie viel Gene pro Gen Stück

 - 왜 값들이 정규분포가 아니라 지맘대로 나타나다

없는 폴리 : 크로모좀 스트럭쳐.\

 - 위의 이유가 크로모좀의 형태때문

 - 히스톤 단백질을 DNA가 감고 있다, Histon Octamere

 - Chromatin 이란 개념이 등장. beads on a string

 - lockeres Euchromatin von dicht gepacktem Heterochromatin

 - 어떤건 록커하게 엮여있고 어떤ㄱ너 덴스하게 엮여있다. 이건 트랜스크립션 펙터의 다양성에 나름의 직관을 준다

 - 크로마틴의 구조가 Pathogene Pilze 의 Entwiclkung 과 밀접한 연관이 있음을...

없는 폴리 계속 : 크로마틴 구조, Wie kommt es zur Veränderung der Chromatin-Struktur?

 - Euchromatisch / Heterochromatisch 인지는 Histon-Acetylierung auf Ladung und Struktur

없는 폴리 : Effekt der Histon-Deacetylierung auf Ladung und Struktur von Chromatin

 - neue Gene Identifizierung 에 필요한 관점 

 - T-DNA 를 통해 태킹하는 것과 연관성?

25. 호몰로그는 예를 들면 휴그로뮤찐 레지스텐스 카셋을 성공적으로 austauschen

 - Antibiotikum Gene 가 있지만 동시에 WT Gen 도 포함한다...

 - 이건 이거 나름 페노타입에 있어 의미가 있다고?

27. CHSV : Chitin synthese Gene

없는 폴리 : Deletion von FET3-1 FET3-2

28. 어케 유전자 클로닝?

- 컴플리멘트 : 히스티딘 유전자를 메디엔에 주고, 어쩌고

29. 시작은 A T G (Met) 

- 왜 5 프라이머와 3 프라이머가 필요한지 설명하시오

30. hoch konservierte Bereich : 빨간부분. 아마 프라이머가 작용하는곳?

 - Sequenze 를 컴퓨터로 계산해서 가능한 아미노산을 생산할 수 잇는 가능성 계산

 - 빨간건 아마 엔자임 같은 단백질을 담당하는 곳일 가능성이 높다

 - 동시에 기존 알려진 필재의 유전자와 비교

31. 위의 과정을 거쳤으면 Agrose Gel (예시) 로 스크리닝한 후 Bank 에서 비교하여 결과 gelangen

32. 이 부분은 Gen Bank 이용 : 왜 vollständige Verdauung 을 안하고 partiell 하나

- Digenstion 이라 부른다 : Fragment 를 리스트릭션 효소로 얻어낸다, 근데 어디가 잘릴진 모르잖아! millionen  쪼개서

- 문제는 gDNA 는 Intron을 갖고잇으니까 쓸데없는게 들어있을 수 도 잇다

- Hybridiserung : 다시 설명. gDNA 를 높은 온도에서 schmelzen. 동시에 markierte Sonde (gezieltes Gen, 예를 들어 Histidin Kinase, radioaktiv markiert) 도 Schmelzen 한다. 둘을 같이 둔 후 온도를 천천히 낮추면 섞여들어감, 그게 Hybridisierung

- 그림에서 Filter 를 실제로 적용해서 저렇게 2개만 점이 딱 보이ㅡㄴ거라고.

33.  CP 되있는게 carrier protein

34. 4‘-Phosphopantetheinyl transferase : PPTase. 아주아주 병리학에 중요한 녀석. 여러 역할을 한다

 - NRPS 없으면 식물로부터 철 못뺏는다

 - 지방산

 - PKS : Melanin 생성에 핵심적 역할을 하는데 멜라닌은 Appresorium 생성에 핵심역할. 이건 virulenz가 아닌 Pathogenität을 결정하는 요소. 아주 중요하다 이말이야. 이건 한 Pigment 의 역할

 - 결론적으로 PPTase 를 막으면 병원균 성장을 원천적으로 차단가능

35. npgA : non pigment A 란 의미. 

 - 8백만개의 클론 중 npgA , lys5 를 겨우 찾아냄

 - 다 하고 그걸 이게 겐방크에서 돌려서 찾은 듯

36. Lustiges Dinge..

- invertase

 - HXT : Hexose transporter

 - Sekretorisch weg : Vesicle - Golgi - PM - Sekretion

37. Invertase 를 이용한 앞에 말했던 스크리닝 디테일

 - c DNA : Sekretationssignal

 - 골지체서 SUC2 sekretiert

 - 그럼 밖으로 나간ㄷ SUC2 - Hefe wachsen

 - tubulin ?

- verschmelzen : fuse

- CoA


[2. Pilzezellwände und Hyphenwachstum]

1. Lipid는 매우 가벼워서 Sporen 휘리리

 - apikal wachsen 은 큰 특성. 무조건 끝에서 자라나낟. 

 - Hefe : mutter / Tochter, Gärung

2. apikal Wachstum : 수많은 Vesicle 이 첨단에 모임. 40,000 엄청 많은 숫자인듯...

- 첨단에서 멀어질 수록 세포 방향이 pararell 하게 서서 Turgor Druck 높이고 반면 맨 앞 첨단은 막 섞여있어서 상대적으로 weich

3. Hypothese 다 이말이야 RegidaZelle

4-15 수업 쨈. Streiken

16. 어떻게 B-1,3 Glucan 생산되는지 설명중. GLS, GLT, Rho1, 재료는 UDP. 어디서 이들이 작용해가 글루칸이 만들어지나여?

- GLT 는 아직 많이 연구가 안된듯

- Chitin & Immunsystem

17. 어떤 녀석들이 베타 글루칸을 만들고 어디서 발견되는지에 대한 실험

- C.graminicola 의 의미는 이녀석이 M.oryzae, 의 친척이며 

- 키틴 생산은 osmotische Stabilisierung 과 관련에 여기서 관련이,

- 베타 글루칸 생산이 저해되면 세포는 osmotische Stabilisierung 에 큰 문제를 갖나?

- 이 실험, genetische Complementation 은 무엇을 말하나? 여기선 어떤걸 바꿨지?GLS?

- 실험은 오른쪽으로 갈 수록 verdünnt, 10, 10², 10³...

- AG300 플라스미드 : Transformieren 할 때 만날천날 나오는 녀석이라고. 

- YPDS 를 통해 여기서 차이를 만드는 건 osmotische Stabilisierung 라는 걸 알 수 있다고

- GFP 어떻게 갖다붙였는지 설명 : GLS1 의 끝트머리의 1k 정도되는 Basen과 같은 파트를 GFP 의 앞에 붙이고 GFP 맨 위에도 같은 위치에 맞는 Basen을 붙여서 유전적으로 문제없이 그대로 GLS1 뒤에 GFP를 붙입니다.

- confocal microscopy : jeder Schichte 를 잘라서 관찰, 

18. 박사생이 집에도 안가고 죽어라 해서 이걸 확인했다고

- HeteroChromatin

- Heterochromatisch 는 더 짧은데,

- 왜 넉아웃이 안되는가? 잘 교체됐는데도?

- 아주 많이 했는데도 안되면 어쩌면 그 Gene이 essencial하거나 heterochromatisch 한 거인지도??? 그건 그거나름 큰 발견

19. 세포벽 생산에 관여하는 대부분의 유전자는 필째에게 필수적이라 Deletionmutagenesen 이 무리데쓰.

- Lösung1: Verwendung regulierbarer Promotoren,

- RNA Interference : RNA-Interferenz (RNAi)

20. RNA Interference : Silencing, 

- dsDNA : double strand

- DICER : 두줄 째로 쪼개는 효소

- RISC : 

21. 워낙 잘 연구된 종이다.

- P-trpC 시작 프로모터

- 그래픽 B,C 를 통해 iRNA 가 GLS1 의 발현을 효과적으로 잡았음을 알 수 있다. GLS1 발현률이 낮아졌으니까.

- 또는 D,E 처럼 GLS1 에 GFP를 붙여서 발현을 가시적으로 관찰할 수도 있다 : D 를 통해 GLS 발현이 낮고 동시에 그래픽 E를 통해 B-Glucan 생산이 연관성있게 낮아졌음을 확인

22. 그래픽 E ㅇㅔ서 알 수 있듯 그래픽 D와 비교하면 필째는 세포벽이 없으면 Figmentiert 구획화된다는 거슬.

- 즉, C 처럼 까맣게 점점이.

- 이번껀 베타 글루칸 실험. 키틴 synthese 와의 실험과는 어떤 결과적 차이가 있나여?

23. 코니디엔-아프레쏘리움- 공격적 휴페 - 그다음 독 생성해서 Necrotroph Umwandlung - 새로운 코니디엔 생성 - Sporen

24. 문제? 식물은 언제나 조금씩 B-glucanase, Chitinase 를 sekretiert 하는데 요걸로 필째 벽 녹여지면 딱 걸림이건 PAMP 에 딱 걸린다고

-PR1 은 키티나아제, PR3 는 베타글루카나아제이며 typische Abweherreaktion

25. 24HAI : Biotroph 에서 Nekrotroph 로 바뀌는 시점에서 베타 글루칸, 키틴 생산이 확 줄어들고 그 다음 sh 독이 생성된다.

- 여기서 가능한 스펙큘레이션 : 특정 Gen 이 anschalten 되는건가? 

26. 이 실험도 세포벽을 강하게 몬만들어서 아프레쏘리움 생성이 안되서 그런듯

- Turgor Druck  : 세포벽이 강화되어야 하나 B 글루칸 생성이 안되면 verschweichert.

27. ph : primäre Hyphe

- 세포벽 생성과 관련하여 침입단계에 변화가 생기는데 단순히 형태학적 변화 외 생리학적 변화도 동반될 것이다

- Toxin Transporter 같은거

28. PtypC 는 베타글루칸 항상 생성하도록 설계되어 있다. 만약 오버엑스프레션되면? 비오트로프 휴펜에 문제가 생김

- D 에서 보듯 퓨토알렉신이 관찰되는데 E 에서 보듯 아프레쏘리움 왕 쎄졌다

- G : PR (anti micro DNA, Pathogenesys Related) Protein, 이건 시험에서 항상 묻는다, in der Klausur wichtig

  PR1 은 키티나아제, PR3 는 베타글루카나아제이며 typische Abweherreaktion, 희안하게 더 잘걸린다?

29. 이로인해 알 수 있는건, biotrophic Hyphen은 Abwehrreaktion 을 유발한다는 것

- 베타글루칸은 eng betroffen, 하나가 만들어지면 하나가 만들어지고..???

- 베타글루칸 센싱과 Abwehr (PAMP signal) 의 연관성을 유전자 시퀀스 비교로 설명중

30- 안하고 넘어감

31. KRE5, KRE6 는 Killer Toxine Resistence

- 둘 다 B-1,6 Glucan Synthese 하는 녀석인데 이게 없으면 

- A : YPDS - Killer toxin 메디엔을 통해 이 둘이 톡신 생성에 연관이 있음을

- B : KRE5, 6 이 funktionell entsprechen, 

- B 오른쪽 : 사실 아직까지 KRE5, 6 의 작용은 알지만 정확히 프로틴의 역할은 모른다, biochemische Struktur nie bekannt. 논문으로 낼라할 때도 사람들이 잘 몰랐다캄. 

베타 글루칸1,3은 

- 2번째 Verzweigungen 베타글루칸은 공격에 있어 중요 : Pf Erkennung hinkriegen 만약 베타글루칸이 나눠지지 않다면!!!

32. 베타 글루칸 1,6 염색물질을 당시에는 안팔더라고, 그래서 이ㄴ터넷에서... 아 못알아들음

- für jedes genetischen Problem, gibt es genetische Lösung

- 염색물질 스토리 왕 복잡. 멜라닌이 있으면 Wellenlenge 문제가 있어 잘 안보이는 일이 있는데 그게 말이지...

- 어떤 물질은 아프레소리움을 염색시키기도 못하기도. 정확한 물리적 기작은 모른다 교짱도. 그러나 20개정도 염색물질을 테스트해봤는데 여튼 하나 얻어걸린것이다. 그것만해도 대단

- 오른쪽 그래프에서 보듯 biotroph가 끝나는 시점까지가 중요하다. 그다음은 독 뿜는 시점이니까 들키는 말든 상관없음

- 오른쪽 그래프 GBP  : Glucan Binding Protein

33. B1,6 글루칸 Down regulation : 

- 베타글루칸이 없으면 Festigung, Vernetzung 이 안된다, 쉬바흐 흐물흐물 *E,F,G그래프 비교)

- I,K,L 을 통해 다운 레귤레이션 확인가능

- M 을 통해 알 수 있는 것 : Korerrlation zwischen B 1,3 und B 1,6 

- N : 

- 그럼 이 연계가 Verkünpfung 이 Infektionsprozess와 어떤 연관? : 

- 오른쪽 A : Appresorium 생성이 다운레귤레이션에서는 좀 시원찮다, 즉 Penetration 과 관련

- C : 왼쪽 A 에서 보듯 RNA생성이 (즉 트랜스크립션 활성) 50프로 정도 줄어들었지만 아프레쏘리움의 공격성은 거의 100프로 가까이 손실됐음을.

- D : 아프레소리움의 anheften 이 시원찮다!! 못 붙어있으니까 공격도 몬한다

34. C 가 보여주는건 WT 는 Infektionshyphen 제대로 형성됐으나 뮤탄트는 시원찮음

35. A : 흥미로운건 상처가 있는 경우 Biotroph 를 거치지않고 바로 Nekrotroph 로 진행된다는 것!

- 이 페토젠은 사람도 감염될 수 있다 : 식물에 의해 상처나면 글로 포자들어가면. 근데 아주 희귀한 경우. 이걸 통해서 Fungizide 가 Humanmedizin gegen Pilze 의 Anwendung 을 엿볼 수 있다. 또 다른 예시는 무좀에 대한 것도 이런 가능성을 볼 수 있음, 

- D, E : 빛나는 단백질들이 아주아주 높음을 알 수 있다. massive Steigung der Immunsignal

- F : 어떤 시그날들이 구체적인가? Terpene 는 putativ 즉 바샤인리히 한 지표Parameter 로 이해하라고. 비오트로프일 때 시그날이 터진다

36.  Down regulation of B-glucan synthesis and modificatiion of chitin during biotrophic development are required for evasion of plant defense

- 30 페이지 껄 여기서 다시 설명 : hoch sensitives Verfahren um Abwehr zu aktivieren, 아프레소리움에서 볼 수 있는 4, 5개 짜리 연보라 베타글루칸 1, 6은 Signal Effektor 이다. 그래서 그 다음부턴 안만들다가 네크로트로프에서는 다시 만든다

- 30 : GPI 는 verahncohrt 프로틴. 

- Biotrophphase:  iv, ph 는 큰 볼륨을 가지고 더는 베타글루칸을 만들지 않는다!!! ausschalten. Abwehr 피해야 하니까 

- Polyglucosamin : schlechtes PAMP 그래서 압베어 아주 쪼금만 유발하는듯. 키토산

- 오른쪽 그림이 키틴이 키토산(폴리글루코사민) 으로 대체되어있음을  알 수 있다. Chitin Erkennung zu vermeiden

- 비오트로프파제에서는 붉은색 키틴 대신 노란색 키토산으로 바뀌면서 PAMP Erkennung 을 삭 피한다

37. 위의 스토리를 분자단위에서 Polymer 위주로 다시 설명 - 모델 in der Klausur wichtig

- GPI : 페어앙커트, dadurch 필째가 식물의 PM Kontakt halten bleiben kann, GPI assoziasiert mit verzweigerten Chitin

- Kreuzungsnetz 는 GPI 에 달린 프로틴이 달ㄴ 위치의 프로틴과 이어지면서 생성됨. 엮인다 이말이야

- 좋은 말씀하시네. 본인은 석박하고 연구할 때 혼자서 주로 했는데 지금와서 보면 그게 gute Strategie 인지 의심이 간다고. 작은 그룹이라도 여러 사람이랑 토론을 하며 발전시키는 과정이 더 도움되었던 것 같기도하다고.

32. 그 다음인데 32 라고 되어있음. 페이퍼도 읽어봐라고 하네. 교짱 2번째 박사 논문이라고  in der Klausur wichtig

- Gpi 12 는 키틴 아세틸라아제. 

- 당시에 확인한건, Gpi12 Mutant 는 만들 수 없엇는데 어쩌면 Gpi12는 lethal Faktor für Pilze 인지도.

- gpit12 에 의해 글루코사민 이 쿹고나면 여기에 에탄올아민이 달라붙고 이 GPI transamidase complex 에 의해 에탄올 아민에 프로틴이 달라붙으면 그제서야 GPI anchor 가 완성된다. 

- 이 complex 는 프로틴의 C terminus 를 쪼개고 거기에 프로틴과 에탄올아민을 엮는다. 

- 이 프로틴은 예를 들면 키틴케테, 베타글루칸에 Affinität 을 갖고있어서 Festhaltung 을 제공한다 궁극적으로. 

34. 뮤턴트 못만드니까 RNAi 전략을 사용 for down regulation

그다음 폴리는 안함

34. 그 다다음 폴리

- keine Virulenz besetzen

- C : 야생종은 굵고 튼실한 휴페 가짐. RNAi 로 약화되면 영 히바리가 없다

42. 이런 연계를 통해 얻은 새로운 효과적 면역획득방법 : RNAi Silencing pilze über Pflanzen

- HIGS : 식물의 유전자 중 Pilz spezifische Fragmente 를 골라서 만들도록 한다. 물론 생각되면 위험은 있을 수도. 이 식물을 먹은 사람에게 RNA 사일런싱이 발생할 지도 모른다는 걱정.  근데 이 대상이 키틴 처럼 필째 ㅌ특성으로 한정

- RISC 라는 Kette Ausgangspunkt 를 침묵시켜서 휴페 Verlängerung 을 원천적으로 막는다. 기발하다 이말이야

- hochspezifische Geschichte

- 문제는 뮤코릿쩌에는 해를 안끼쳐야 되니까... 해법은 아마 Blatt Promotor 를 만들어서 거기에만 발현시키는게 어떨지?

- Sense-anti sense 관계로 들어있는 RNA?

32. Short dsRNAs are taken up by the pathogen 

- Podopphaera leucotricha : echte Mehltau von Apple. 마켓에서 살 수 있다

- dsRNA (double stranded RNA)  는 앞의 HIGS 사례처럼 Pathogen에 의해 흡수됩니다. 여기선 가시적으로 확인할 수 있지요

33. 그래서 HIGs 는 이 녀석에도 유효

- Bonitur : tranierte Leute beobachten und Virulenz einschätzen

34. CaMV35S 는 프로모터인데 T724 와 비교하면 Stengel 에만 국한되고 감염이 잎은 발생치 않는다?

35. Venturia inaequalis : apple scab fungus

- 뭔소리??

36. Expression of a HIGS construct trageting a single fungal cell wall biogenesis gene in maize mediates resistance to C.graminicola and mimics the mutant phenotype

- 이 폴리는 없다!

- angewendet um resistenzpflanzen zu erzeugen

- 독일 교육 및 과학 어쩌고 부에서는 이런 새로운 기술을 연구하는 프로젝트를 할 때 꼭 작은 지역 회사를 끼고 하길 원한다. 바로 프락시스에 적용하기 위해서임.

36-41 은 하지도 않음. 폴리에 없다

43. 왜 베타 1,3 글루칸을 연구해야하능가

44. 일본에서 연구

- 델타 ags 는 B에서 보여주듯 pflanzen oberfläche. 알파 글루칸은 아마 필째 주변을 덮고 있을 것이다. 근데 아마 필째는 스스로 글루카나아제를 갖고 있지 않고 식물에 코딩되어있는 걸 쓰는 것 같다고. 

- 이 페이퍼 꼭 읽어야한다고. in der Klausur wichtig

45. 여러 별개의 병원균들도 마찬가지로 식물의 AGL 집어넣으니까 병원균이 다들 힘을 몬쓰네예

- 가설은, A-glucan 이 녹으면서 Pore in cell wall 이 넓어져서 식물이 내는 디펜스 물질이 효과적으로 닿을 수 있다는 거임

- Rhizoctonia solani

- Photo bleaching experiment : FRET

46. 해석이 어렵다.

- 수치는 Abwehrgene in Pflanzen angeschaltet.

-앞의 44와 비교하자면, 그래프 A 에서는 7시간이 지나도 아직 Infektionsstruktur 안만들었으니 식물 밖에 있고 PAMP 도 식물 외부에 있을 것이다. 그런데 여기서는 2시간만에 식물의 방어기작이 활동했다. 어떻게 PAMP 가 인식되었는지는 교짱에게도 unklar 


- exerted over the palm of 

- sind KO-Experimente unerlässlich



[3.Druck und Enzyme bei der Penetration]

1. 여러 침입 전략들

- 제일 왼쪽 : Appresorium

- p´Penicillium-Fruchtfäule : ?

2. Rost Pilze 는 오른쪽 그림에서 보여주듯 세로 줄이 있으면 이걸 가로질러 가려고 하는 성향이 있다

- 그 의미는 필째가 기공처럼 식물에 자연적으로 발생해 있는 구멍을 찾아서 들어가는 성향을 얻었음을 알려준다

3. 또 다른 침입 전략 / 휴드로포비찌텟 : 오른쪽 아래에서 그 연관성을 볼 수 있다

- Erkennung 의 다른 펙터 : Hydrophobizität 

- 어떻게 측정? Wassertropfen 의 형태를 볼 수 도 있다. 그 형태가 하이드로포빅할 수록 작고 똥그란 물방울 형태를 이룰테니 그 Durchmesse 를 휴드로포비찌텟 인덱스로 삼아버림 ㅋㅋㅋㅋ

5. osmotische Aktivesäure 를 아프레소리움 안에 모은다 *Glycerol 이겠지. 그러면 물이 숑숑 들어와서 Turgor Druck erhöht wird

- 오른쪽 페트리샬은 Melanin꺼버린 녀석

6. fig.1 18시간 정도 지났을 때 외부의 삼투압이 ... 이거 이해 잘 안됨

- 여튼 Turgor Druck 을 측정하는 방법을 묘사중 

- Cytoricy : cell collapse

- 오른쪽 아래 그림 : weich Membran 은 팽압이 얼마든 잘 뚫린다. 거진 100프로 뿅뿅

7. 멜라닌 생성은 매 단계마다 H2O Spaltung되며 진행된다. 

- DHN (디휴드록시 나프탈렌) 이 Radikalisierung 되서 멜라닌된다?

- 멜라닌 형성이 안되면 필째는 살아남지 못해우.  그ㅐ 예시가 오른쪽 Cg 1.502

- Tricyclazol, Carpropamid 둘 다 Fungizide 이며 멜라닌화를 inhibit 함으로써 병원균 조진다. 이들은 상대적으로 spezifisch 한 풍기찌데이며 이거를 위해선 쭐라슝이 필요하며 꽤 비싸다. 

- 멜타우나 로스트면 뭐 당연히 중요하겠지, 근데 아프리코제나 에어드베어 같은 특정 쿨투어플란쩬 대상인데 그닥 흥미가 없다. 쭐라슝에 비해 생산자가 판매로 인해 얻을 기대소득이 거지같은가보지

8. Poly Kitin Synthase 1 : melanin 생산에 핵심적인 엔자임. 실험방법에서 CP, ect 의 의미는?

- 휴그로뮤찐으로 넉아웃 생성 확인함

- CP(complementary ...) 는 아무래도 넉아웃에  다시 멜라닌 살리는 뭔가를 넣은 녀석인것 같은데 안확실하다.

- mock은 스포어 없이 그 물을 넣은것. 피펫팅에서의 오염을 염두에 둔 조치인듯 

9. 또 엑스트라 오스모틱 프레셔로 측정

- 의외로 PKS1 없어도 투어고 드룩에는 야생종과 차이가 없었다!!

10. A : a 에서는 외부에 파란 휴페가 식물 밖에 형성되어 있음 을 알 수 있다, 

- C : 핵심은 Lysierte...

- E : 

- D : 요지는 아프레소리움이 세포벽 분해 효소를 분비하는데 멜라닌 없는곳이 아프레소리움에 있다면, 그쪽이 녹아버린다 이말이야

- 위의 결론은 교짱 개인의견. 실험 하는 중인듯

12. optische Wellenleitern : 

- 아프레소리움의 드룩은 사이즈를 고려하면 어마무시하게 센데 그걸 버티게 해주는 CPI Protein 도 주목할 만함

13. Melanin notwendig für Kraftwendung

- SCD1 : 오른쪽이 빌트튭?

14. Penetrationsvorgang 에 필수적인 효소 = 침입 과정 

- Cutinase : Cuticular abbauen, 

15. Suberin : 큐틴처럼 Pathogen 이 뚫어야되는 튼튼한 녀석. 카스파리안 대 구성요소

16. 큐티네이즈가 Serine esterase 임을 아래 그림으로 알 수 있다

- 모든 cutinase는 serine 에스터네이즈 지만 그 역은 성립치 않을 때도 있다

17. 필째의 Cutinase 유발을 위해서 필요한 진 transcription 연구

- 여기서 보여주는건 eine spezifische Reaktion 이라는 것인듯

18, 오른쪽 흐름 : 큐틴 erkannt - 그리고 Cutinase activated

19. 아주 좋은 실험이라함

- 오른쪽의 - 는 큐틴 모노머 없는거, + 는 모노머 있는거

- M21, M25 는 후사리움에 있는 큐티네이즈 유전자를 다른거에 넣으니까 발현됨. 이게 왜 놀랍냐면 다른 병원균에 있는 게 다른 종에 들어가서도 연동됐다는 것... 인듯

- 오른쪽 그래프 : Quantifikation des Proteins

- ELISA 또는 Western Blot, 엘리자 설명할 수 있어야 함 in der Klausur wichtig

- ELISA : Enzyme linked Immunosorbent Assy Kaninchen 여기서 또 나옴. 왜 항원항체 반응 할 때마다 Kaninchen이 등장하나여?

20. 교짱 관점에서 Spektaculär!

- Position 6: 

- 이 실험의 시사점 : Cutinase 는 Pathogenitätsfaktor 라는 것

21. 적절한 시점, 적절한 위치에서 분비된다 이말이야

22. 큐티네이즈를 필두로 하는 감염 단계

- 큐틴 감지 - 큐티네이즈 생성 및 분비 -Antikörper???

24. 오른쪽 그래프의 야생종과 맨아래 컨트롤의 큐티네이즈 활성을 볼 것

25. 흥미로운건 큐틴이즈 넉아웃도 감염을 열라 잘 시킨단 말이지

- 그 말은, 후사리움에게 있어선 큐티네이즈 는 파토게니텟펙터가 아니다?

- 그런 해석보다는, 큐티네이즈 생성과 안티바디 반응에 관여하는 다른 유전자들이 있다고 해석하는 편이 낫다는듯

28. Diversity of cutinases from plant pathogenic fungi : different cutinases are expressed during saprophytic and pathgenic stages of alternaria brassicicola (뮤턴트는 Cutinase deficiency)

- PNBase activity : cutinase 처럼 활성화한다는 의미인가?

- Glucos 는 큐티네이즈의 Reppresor

- 오른쪽 : 야생종(1번) 은 

- 문제 : saprophytical 인 녀석으로만 실험했다는 것

29. Infektionstest 

- 아래 그래프 : 위에서 보듯 야생종과 뮤턴트는 큐티네이즈 활성 차이가 있음에도 아래에서 보여주듯 Virulenz 에는 둘다 차이가 없었다ㅡㄴㄴ 것

30. unterschiedliche Cutinase 는 abhängig von Substrat

- Wirsblättern 이라는 다른 기질 위에서 기르면 별개의 큐티네이즈 활성이 이뤄진다

- 즉, 한개의 유전자만 관여하는게 아니고 여러개가 기질 별로 활성을 달리 한다는 것

31. ?? 이해못함

32. 이번엔 펙틴이다

- 펙틴 : 펙틴메틸에스터레이즈 는 카르복실기를 아래에 갖고 있고 디폴리머레이ㅈ는 glycosidische Bindung 갖고있다.

즉, 저 두 부분이 깨지면서 분해되는 듯

- 펙틴은 아래와 같이 단계를 거쳐서 분해된다고.

- 네크로트로프 필째는 120개 정도의 세포벽 분해 효소를 갖는데 이건 아주아주 많은 Menge 임미.

33. Die Zellwand monokotyler Pflanzen

- 모노코틴은 디코틴보다 펙틴이 적으며 파토겐의 이 둘을 구분하는 지는 말하기 어렵다!

34. 엑소 슈팔튭은 DAMP 를 유발하기 어렵다, 왜냐면 특정 길이를 인식하게 하려면 계속 내야되니까.....???

- 엔도는  슈팔튭은 DAMP 유발이 엄청 빠르단다

35. echte Mehltau 와 falsch Mehltau의 생장형태, 위치, 증상 차이는?

- Oomycetes 연구의 차이 : 필째와 달리 Diploid 이기 때문에 넉아웃을 만들지 못하고 RNA 전략을 써야된다. 

36. Endopolygalacturonase : 

37. Säulenchromatography : 뭥미. 프로틴은 각자 아미노산을 갖기에 그 프로틴이 같는 아미노산들을 주욱 늘어놓고 그 중 뭐가 들어있는지 구분하는듯

38. PGN, PGX 는 엔도, 엑소 의 차이. 이거 관련 실험은 다시 읽어야 이해할 수 있을 듯

- GPD :

39. 6 번을 보면 PGN, PGX 가 없다우. 

40. 뮤턴트해도 여전히 Virulenz. 

41. 1번 넘버는 전부 다 넉아웃됨

42. Xylanase 

- 오른쪽 : -는 그냥 잎, + 는 inoculated. 

44. Putative DAMPs 

- 결론?

45. 앞의 내용들을 zusammenfassung 하여 만든 모델인듯

- Snf1 : Hefe에 있는 Saccharose Abbau Enzyme. 

- Cre A : Catagory Reprresor, 이건 대부분의 폴리 어쩌고 *PGN 같은거의 프로모터에 붙어있는 녀석이다.

- CWDE 발동은 SNF 를 필두로 진행된다구

46. 위의 모델을 실험해봤다

47. Gene expression profile and growth rates on different carbon sources

- Glucose, 

- Xylan, Maize cell walls 처럼 poly 한 녀석에서는 뮤턴트와 야생종의 성장이 확연히 차이난다

- 어떤 의미론 spezifisch

48. control 은 아무런 페토겐도 없음

- 오른쪽 비교를 통해 Toxin 생성은 뮤턴트와 야생종이 차이가 ㅇ벗다

- 즉 SNF1 은 독성을 만드는게 아니라 세포벽 분해 효소와 연관있는 친구다 이말이야

50. 해석은 Cre A Bindestelle 의 여부와 유전자에 대한 페토젠 종간 차이 설명

51. 설명함

52. 세컨트 균사 주목 : 노란막대기. ??


[Toxine und Virulenz]

2. 한 세포가 100개의 host cells 를 umbringen kann

- Epoxid 그룹은 Toxine 에서 자주 발견되는 구조다. 

- 오른쪽 : 이녀석은 Windverbreitung

3. wirtspezifisch : Alternaria, Helminthosporium 2가지 Gattungen 이 대표적. 

-   HC-Toxin : carbonum 은 지금은 Helminthosporium , 오직 이 종만 특정적으로 생성가능한듯

- AM : Alternaria

- HV : victorie는 host?

- T : T Rasse 는, 온갖 이름들은 그래도 

- NH zusammengefügt, 한데 이들은 ribosomale Protein이 아니다. Polypeptide 와 nicht ribosomale Peptide 이 두개가 독 중에서 대표적 종류인듯

3. 종특이성에 따라 400,000 배나 도제가 차이난다구

4. AK : 일본에서 왕 난리치는 녀석

- HC : histone deacetyliereung영향을 미친다. 

- HM-T : 특히 미토콘드리알레 멤브란에 데미지

5. 공격 대상인 히스톤의 역할과 구조

- Beads on a string

6. B 에 나와있는 구조가 Beads on a string 방울방울 엮여있네. Euchromatin

- C. 가 다른 또 하나의 구조. 특정 구조들은 Gen-Regulierung 과 연관있다. Heterochromatin

7. Deacetylierung 은 크로마틴의 무엇에 영향?

- Acetylierung되어야 Euchromatin이 된다. 

- Hetero크로마틴은 강하게 엮여있어서 발현이 안된다는듯

8. HC Wirkung : 아래 병 Northern Corn leaf blight 는 광합성을 못하게 된다구

- 오른쪽 아래 : Histon Deacetylase (HC) 는 유독 낮은

- 공격 기작은 아까 설명했던 데아세틸을 하는데 코딩된 유전자를 발현시키는게 (예를 들어 Abwehr) 아니라 모든걸 발현시켜 엉망으로 만든다.

9. dialysis : 5kda, 10 등 사이즈를 다르게 좀... 이해가 어렵네.

- HC : 악티비텟 터진다ㅏ. 근데 HC가 줄어들어도 L-Aeo 가 아마 영향을 계속 발휘해서 독성이 잔류한다는 거싱ㄴ듯

10. TOXA 에서 HC 를 만드는데 만드는 족족 외부로 보내서 세포막 내에 HC 농도가 안높아지게 유지

- ausgeschieden 이 

11. GT : Keimstoff

- AI : Appresorium, MA : 이것도 appresorium 이라는데 '

- 아프레쏘리움과 HC 톡신 생성과 시간적으로 너무 ㄴ낮든다!

12. TOXA 는 톡신 트랜스포터

13. CEHF gene

-+는 톡신 유. 반대는 없음

- 이 실험으로 꽤 큰 

14. HTS : unspezofische Prptec

15. 모든 소소한 엔자임, 단백질 등이 어떤 연유로는 관여하고 있다.

16.. 이 단백질 Tetracylain  :

17. Virulenz Faktor 라고유-

- SNF 굳

18. 또 다른 Wirtspezifische Toxin : T-Toxin  (이게 요음.

- Stickstoff 가 없고 리보조말레 가

- T-urf13 여튼 꼬 큰 문제가 되는 외구긴ㅇㅈ

19. 아래보면 T-Toxin드간뒤로. 완전 재앙이라고

막 정신없이 지나가는데 내가 잠이 너무 와서 다 놓침

25. NPS4 는 기억해줄만할 정도로 큼직하다. 

26. 여러가지 색깔, 즉 여러가지 메디엔에서 기른다

- N이 부족한 경우 필째는 독을 스멀스멀?

27. 중간결론 : Wirtspezifisch 한 녀석은 Pathogenitä에도 크고 주요한 역할을 한단다

- 위의 Virulenz 테스트 :

가장 빠른 필째 비룰렌쯔 테스느

- H2O2 는 대표적인 Abwehr anfwlflllllllllllllllllllllllllll

28. PPTase : 

29. AAR 은 Lysin sythesize 에 관여한다.

31. in vitro Versuch

32. Mobilitätssschift는 무슨 의미? 

- 사실 CgPPT1 의 역할은 -- 이따. 

31. D : 류진을 다시 주니까 자란다? PPT1 는 류진비오쥰테제, 멜라닌 비오쥰테제에 필수적이다. 

- D 의 여러 관계 해석을 통해 PPT1가 컨트롤하는 요소들을 

32. 

33. C에서 보듯 멜라닌이 생성이 안되서 뻥 하고 터져버린다... 아주 효율적이다 이말이야.

34. 필째가 식물을 죽이기위해서 톡신이 필요하고 기본적인 내용 쭈자멘파쑹햇다.

35. 


























출처 : https://www.reddit.com/r/labrats/comments/4v24mj/can_someone_explain_the_difference_between/

https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=hafs_snu&logNo=220855450875&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.de%2F


- homolog : 동족체, 주기율표에서 같은 족에 속함, 또는 상동기관 (기원동일, 형태나 발생에서 유사성). 진화 과정에서 유효한 관계가 있는 유전자들이나 단백질

a gene related to a second gene by descent from a common ancestral DNA sequence

- ortholog : genes in  different speices that evoloved from a common ancestral gene by speciation

wenn ihr gemeinsamer Urahn ein Artbildungsereignis durchlaufen hat.

- paralog : genes related by duplication within a genome, wenn ihr gemeinsames Vorläufergen eine Genverdopplung durchlaufen hat

 gene duplication : 말그대로 한번 더 재조합해서 일부 구간이 동일 유전자로 2배가 되는 것. Mutant 임니다, 즉 DNA Frequenze 영향을 줌, PCR 의 Polymerase 가 하는 일이 이거다. 

- r Vorläufer : precursor,  전구체, 선행하는 물질

- The Expect value (E) is a parameter that describes the number of hits one can "expect" to see by chance when searching a database of a particular size. It decreases exponentially as the Score (S) of the match increases. Essentially, the E value describes the random background noise.


* 전사는 메티오닌에서 시작하나?항상?

- promoter : wo regulierte Expression eines Gens ermöglicht.

식물 유전자의 프로모터는 호르몬 농도, 외부 환경 스트레스, 영양 상태 등에 반응하여 유전자 발현의 특이성을 부여하는 DNA 서열을 가지고 있다. 이러한 반응 요소(responsive element)

- intron : 비발현부위. 의미없는 부위며 반대는 엑손. 진핵세포에 있고 단백질 만들 때에는 관여하지 않으며 transcription 과정서 잘려져 나감

- mRNA : 짧은 시간동안 존재. 전사과정에서 편집 번역을 담당. DNA 로부터 3 BasenSequenzen (Nucleotid) 으로 이뤄진 코돈 (유전암호 단위)  을 부여하며 이걸 리보솜으로 운반. 1코돈은 1개의 아미노산을 결정하며 리보솜에서는 tRNA 가 이걸 읽어들인다.

전사의 시작은 RNA Polymerase 가 mRNA에 필요한 DNA 유전자를 복사하여 생성기키면서 발동. 

- cDNA : complementary DNA 상보적, 즉 상호보완적 DNA. RNA polymerase (RNApol, RNAP), 이 만든 mRNA 에 의하 생성된 DNA. 이걸로 마이크로어레이를 해서 세포내 특정 유전자 발현 정도르 연구할 수 있음.

- PCR : 원리

- reporter gene : DNA의 존재 유무나 프로모터에 연결되어 발현 확인을 하게 해주는 tag gene. 예시는 Luciferase (발현하는 세포가 빛을 내도록 함), Galactosidase(역시 색을 띔), GFP(맨날보는 그거).  특정 프로모터 활성 분석에 사용도 가능 (특정 유전자 대신), 

- auxotrophy : 최소배지에서 생육못하고 둘 이상의 영양소를 생육에 필요로 하는 현상. 유전학 실험에 쓰일 수 있음 two yeast hybrid analyse

- Ansatz : approach

 neue Ansatz für Genanalyse ist...

- langwierig -,

- ovule : 

- cut and paste : 

- reversion of mutation by excision of transposon

- miRNA, : 보통 RNA 보다 좀 작다 (수천 nucleotid 대신 20-25개). 유전자 발현에 영향을 주는 친구인데 mRNA 와 complementary 결합해서 regulatary factor 로서 활약. 식물, 동물, 바이러스 등에서 발견되는 비발현 RNA 분자라고 말할 수 있다.

- helicase : 나선효소, DNA 복제할 때 이중나선을 푸는데 필요한 효소. 


질문

- RT PCR, 

- electrophoresis 할때 쓰이는 물질과 그 녀석의 역할은? SDS

- 여기서 중요한 개념인 isoelectronic 이란?

- 어떤 모티피카찌온이 electronic Ladung을 바꾸나? phosphorilierung

- 2d gel electrophoresis : 결과는 어떻게 나타나는가. 이미지 설명

- hydrophobic protein 은 막단백질일텐데 


Übung

01_Gene Discovery

1. finding gene, Analysing gene, 그다음은 Protein(Localising, anlysing, interaction), 또는 membrane, 

2. 예시: 칼슘체널을 책임지는 유전자?

 - zwei möglichkeit : 1. plant sequence 2. sequence from other organism (mouse, human...)

 - 이를 위해선 vorläufe Organismus 를 살핀다. Verwandtschaftsgrad suchen

3. 보통 인간의 해석된 유전정보를 가져다가 많이 쓴다. 싱기방기

 - 그래도 최소한 대상 플랜트의 gene must be sequenced...

 - 재기된 질문 : 단백질을 regulate 하는 sequence 의 경우 식물과 동물이 좀 다를 수 있다 왜냐면 similar function amino acid 들로 이뤄진 다른 단백질이 담당할 수도 있으니까!

 - 그래서 원하는 형질을 gene sequence 로 찾기보다 protein 를 찾는게 나음 : Blast에서 이 정보는 Amino acid 약자로 나열되어 있음

4. 만약 단백질 정보는 없고 gene sequence 만 있음 우야지? * 이 때도 그래도 다른 생물의 단백질 시퀀스는 알고 있어야함

 - protein query - translated nucleotide search 

 - 어떤 문제? Sequence 는 그냥 나열되어있을 뿐. 어디서 읽기를 시작해야 하나??

 - 17 페이지 : 6가지 가능성이 있고 이 모든게 고려되어야한다. 그래서 검색하면 진짜 여러 가능성을 보여줌 

19. 만약 아무것도 gene sequence 모르면?

 - 코드로 보는게 아니라 function 으로 찾아야 한다. sequence 가 아니다

 - Complementation screen : gene 은 다른 생물 (yeast) 에 집어넣어서 단백질을 발현시키고 관찰

 - mRNA 는 옮기기에는 너무 empfindlich 해서 cDNA 를 이용한다는 것 같음

22. RT-PCR : Reverse Transcrption - Polymerase Chain Reaction

 - cDNA 를 어케 늘리지? PCR 원리 설명 

23. PCR 과정과 참여 요소 설명할 줄 알아야.

 - polymerase 만드는 녀석은 고온 적응된 녀석?

27. cDNA library : 

28. 왼쪽 방법으로 하면 결국 의미가 없다. 쓸때없는 부분이 섞여서 뭐가뭔지 몰라버렷

29. Yeast complementation screen : 이스트 테스트의 요지는? 무슨 메커니즘을 이용하나여?

30. Uracil 이건 reporter gene 과 연계해서 생각해볼 수 있음 

33. 디엔에이 씨퀀씽은 다른 수업에서 다뤄질거임

34. Reverse genetics : function of the gene(protein) in planta

 - Gene (protein) : unknown function -> Delete or overexpress gene -> phenotype 로 확인

37. Agrobacteria 의 번식 방식을 이용해서 식물 안에서 저걸 테스틔

39. Zellteilung - Versorgung  

43. tration thechiqu... langwirig? 한 과정. 전체 다 해서 거진 1년 걸린다.

 - Gerste 젱ㄹ 어렵고 ㅡ

44. 이 실험이 겨울에 학기 시작하는 것과 관련

45. Ovule :

46. T-DNA insertional mu

47. Insertion site Iedns

 : PCR 로 불려서 있는지 없는지 찾아보거나, 

48. 잘 들어갔나 확인하기 

 - 확인한 T-DNA 를 색ㅇ===='

49. 이러한 뮤턴트 뱅크가 있어서 후루룩 훓을 수 있단다.

50. Transposon : copy and paste

51. 이걸로 뮤턴트 만들 수도 있다. 쮸히퉁에서 많이 쓰유요

54. Decrease expression of gene : microRNA 이거 Phosphate 수업에서 잠시 다뤄졌다고.

57. miRNA 를 위용해 phytopathologie 에서도 응용하기도 한다, hex host hix silencing ?

 - ZNF, TALENs, CRISPR/Cas9 이러한 다른 genome editing 은 다른 수업에서 다뤄짐미다.


- transcription and translation : ein wesentlicher Teilprozess der Genexpression. dadurch wird 3 RNA (mRNA, tRNA, rRNA) hergestellt. DNA-Abschnitt dient als Vorlage(Tempate) zur Synthese von RNA. Translation wird als die Synthese von Proteinen bezeichnet. Mit transkribtierte mRNA ...

- amplificaiton of DNA in PCR

- housekeeping gene : 

- semiquantitative RT-PCR : 

- fluorsensieren : 발광하다

- fluorescence quenched by FRET : 끄다? 풀다?

- haften : adhere 붙이다, 접착하다


02_Gene Expression Analysis : mRNA 

2. cloned gene of interest?

6. housekeeping gene : 

7. problem : 열때문에 

8. 이 실험의 결과로는 A, B 가 구분이  잘안된다. A에는 

9. quantitative real time RE-PCR 

11. SYBR green fuorsces green : 디엔에이 염색하기! DNA dye

 - 실험실에서 일어 날 수 있는 이 테스트의 문제? Unreinigung, 우리가 원하는 곳 말고 엉뚱한데 primer 가 갖다붙거나 gelargert. 

unterschiedliche Schmelztemperatua 만약 온도가 너무 낮으면 이 primer 는... Specificity 도 중요한 요소.

14. realtime PCR 의 유의사항 : 결과적으로는 모든 polymer 는 sample 과 온도별 테스트가 전제되어야 한다. prerequisite

15. Realtime PCR with TaqMan probe : 이걸 통해 더 spezifischer 하게 만든다 그 전거보다.. 다만 단점은 비싸다구! 11번 방법은 primer가 전부 다 염색해버리기 때문에 특이성이 낮다고

16. quantification : 영역별로 나눠놓음. 많을수록 빨리 반응이 시작

18. gene expression level  다른 방법음? Promoter activity 프로모터 악티비텟!

20. reporter gene fusion : 예시가 GFP다!!! 이걸 만드는 과정에서 transform target plant 할때 아까 말한 agrobacterian 이 쓰인다

 - 즉, 프로모터의 엑티브 상태를 측정하는 것이다. 

23. GUS B-Galactosidase und B-Glucuronidase : 이것도 염색하는 물질

25. 성장에 따라 파래지는 것은 우리가 측정하고 싶은 DNA 가 발현된다는 거시다.

26. 3번째 방법 : Luciferlase protein from firefly 빛이 번쩍번쩍남. 프로모터에 붙이진 않고 프로모터를 달고있는 gene에 딱 바른다

33. promoter, transcription factor 데이터뱅크도 있다

34. 웨스턴블롯 - 프로틴, 노던블롯 - RNA, 서던블롯 - DNA, 

35. southern blot 과의 차이는 

36. 노던블롯을 하는 이유는 

38. in situ hybridisation : 식물의 조직 gebewe, 

40. 장난아님. in situ rt pcr. 

 - 기존 RT PCR 은 관찰하려면 기존의 위치정보를 잃어버리게 된다. 그걸 극복하고자 함. 

42. 마지막 세미나에서 봤던 것. 뿌리 내 중금속이었나..? 그거 움직임 관찰하던게 이거였음 in situ rt PCR

43. 한번에 여러 gene 동시에 expression evaluaiton

 - Macroarray : reverse Norhern blot, 근데 너무 손이 많이가고 그래서 이젠 더 안쓴다

46. 대신 microarray : 짧은 슬라이드에 뿅 하고 찍혀서 나옴. 색은 녹색, 붉은이 있고 둘이 겹치면 노란색. 검은건 아무것도 없음


- tedious :  지루한, 싫증나는

- collision : 충돌, Kollision, Stoß, 

- proteome : 단백체. PROTEin expressed by a genOME 의 합성어. 단백질로 발현되는 과정 전체에 관여하는 단백질의 총집합

- immunigold labelling : immunogold Localization

- wenn strahlt ,  dann leucht

- interagieren 인터아기-어런


03_Protein analysis

4. electrophoresis : 젤 사이를 단백질이 통과하게 만듬. 움직임 포텐셜은 전기장으로 만들고 통과하는 젤 사이의 공극을 통해 분리

 - 이 기술의 약자 PAGE : PolyAcrylamide Gel Electrophoresis. protein movement 관여 요소는 꽤 많다

 - arcylamide : 독성도 있고 여튼 좀 유명했던 물질. 

7. 사이즈별로 단백질 분리는 어케?

 - SDS : 아까 PAGE 시스템에서 단백질을 SDS 로 끓여서 풀어버림. 헉

 - 예시가 있어야 더 알아들을 듯...

10. 좋은 예시

11. 이제 단백질을 어떻게 visible하게 만들까?

12. silver스테이닝은 굉장히 sensitiv 함. 

13. 이 검은 선은 Rubisco (der häufigste Protein)

14. 스펙시픽 프로틴 뭘 검출할라고 한다? Antibody

18. 2개를 하는 이유는? 

20. 크기 외 단백질을 분리할 수 있는 parameter : elektrische Ladung... 즉 pH Werte 

 - 어떤 amino gruppe 를 갖고 있능가.

 - 이걸 하기 위해선 isoelecric field 를 만들어야 한다. imobilized

28. identify and detect unknown protein : interest cut off*

29. zerlegt und definiert. Gel 안에서 trypsin 어쩌고 하고 extract 해서 Peptie masses determination (Massspectrometrie 로 슉슉) 

30. 측정방법 설명 : 식물에 대해서 힘든 점은 마지막에 펩티드 사이즈가 데이터베이스에 있는 게놈 정보와 비교하여 결과를 얻는데 많은 crop 이 아직 시퀀스가 다 안됐다구.

31. 다른 방법 ESI-MS : verdampfen. 아까 레이져와 비교할 때 장점은 HPLC 같은 liquid separation techniques 과 바로 연계가 가능하다는 점.

33. 이건 크기만 말해주고 프로틴의 Sequence 에 대한 정보는 엄음

34. collision. 

35. 앞의 과정을 계속 반복하면 쌓인 데이터로 아주 그냥 단백질 믹스쳐 한큐 분석이 가능하다구. 근데 온갖 연구 그룹 다같이 모여서 합동연구를 해야함. 빡시다

38. 프로틴 분석 툴 4가지 정리

39. subcellular localization analysis 을 위해선 원심분리하고 각 내용물을 밀도차? 로 나누고 분리된 녀석을 enzyme activity 측정해서 역할 등을 연구한다. anhand ihrer Dichte, 

43. 예시: 사카로제 gradient 를 따라 분류하고 그걸 western blot 으로 양을 디텍팅. 

44. 많은 단백질 localization을 위해선 다른 단백질 구분을 위해 마커를 단다. 그리고 그 마커달린녀석들을 IB 분리, 

45. 이 방법은 상대적으로 불확실 할 수 있다...

47. 안티바디이용. immunostaining : 2번째 안티바디는 1번째와 다른 곳에 . 1번째 마커는 골지에, 2번째는 그 . 안티바디는 각각다른 동물로부터 추출하는 듯. 

49. 더 해상도를 높이기 위해 금 입자를 이용한다. 금 입자에 프로틴을 붙여서 이녀석을 안티바디에 붙여서 해상력 호흐

52. immunocytochemistry 더 높은 해상력을 제공하지만 아무래도 Antibody 에 대한 이해도와 기술이 필요. höhe Ansprüche an Antikörper

53. leuchtet 

54. Ausgangsorganismus : Aequorea victoria 라는 해파리에서 추출한 물질이다ㅏ. 신기하게 생물체 안에서 알아서 leuchtet

56. GFP 는  슈톡콜러? 이용해서 붙인다. Frame shift...  목표유전자를 변형해서 거기에 붙여서 나오게 하는것

59. 원래 골지에 있는 녀석. 

61. 그리고 GFP 는 색깔을 조심씩 바꿔줄 수 있다. 뮤테이션

62. 적녹색맹의 존재땜에 노란색 인거 아주 좋음

63. 관찰하려면 역시 또 fluorscence microscopy 필요하지여. spezifische Wellenlänge 를 Lichtquelle 이용 

 - first barrier filter 이용. 이거없이 일반적 white licht 는 리그닌 같은곳에서 왕반사

64. 가장 큰 문제는 빛이 blurred 한다는 것. 

 - 해결책 : 여러가지. 일단 하나는 집중된 빛으로 부분을 관찰하는 것. 레이저 confocal laser-scanning microscopy (CLSM) 이걸 fokusierte Anlegung 이라카네. 이걸로 한 Point (Punkt) 를 찍을 수 있다, 그리고 기존 conventional fluorescence microscopy 와 다른건 기존은 눈으로 봤다면 이건 detector를 거쳐야 함,

 - 이걸 반복하면 3차원 사진도 만들 수 있다. 문제는 여러번 찍는게 시간이 걸리는데 이 동안 fluorscense protein 이 변성 denaturation 된다는 것.

 

71. 실제 개별 프로틴을 살펴보입시다.

74. 어떻게 한 프로틴 내 아미노산들이 엮이고 구성되는지는 여러 측정, 실험기술을 엮어서 한다. 

75. two yeast hybrid (Y2H) system : 

 - transcription factor 를 recognition site 에 부착한다, 

 - bait vector, prey vector 를 high affinity protein interaction 갖추게 디자인한다

78. AKT1 : 칼륨 카날. central K uptake 근데 특정상황에서 regulate 된다. CBL 은 칼슘과 연관, CIPK 는 키레이스, 

79. 문제점 2가지가 있다!! : 이스트의 핵분열은 막에서 일어나는게 아님

 -최근에 발견된 한계. 그러니까 우리가 실험하고 싶은 펙터(단백질, 효소) 를 만들어낼 수 있는 유전자를 붙여서 만드는데 이스트 내에서는 핵막에 존재하는 단백질이나 핵막의 펙터가 있어야 발동하는 환경을 만들어줄 수 없다.?

80. 이걸 해소하기 위한게 ubiquitin 을 이용해서 막의 조건을 조성해주는 것

81. analysis in planta?

 - BiFC : 베타베론과 2 가지 GFP 는 서로 붙을 수 있다 

 - 근데 이걸로 하면 뭔가 다이나믹한 상황을 관찰하지에는 좀 부족하다는 듯

85. FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer: RFRE

- rot  energie armer , Eisen: höhe

 - violeete bescghrorrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrö                                                                                                             

- centrifugation : 원심분리 Zentrifugation / Zentrifugierung

- quenching : 담금질??? 또는 급랭

- tonoplast : 액포막.

- detergent ; Reinigungsmittel, Waschmittel, 세제

- protoplast : 원형질체. 세포벽을 인위적으로 제거한 세포. 터지기 쉽지만 외부로부터 DNA, 단백질 등을 도입시킬 수 있어서 연구용 좋음.

만드는 방법은 Pectinase, Cellulase 이용

- capacitor : Kontensator, 콘덴서를 의미하며 축전기를 의미. 내부에 전하를 갖고 있음

- oocyte : 난모세포. 난자의 근원이 되는 세포로 난소 내에서 분열 증식을 정지하고 성장기에 들어간 세포


04_Transporter interaction

6. legume root nodule

11. protoplast tpp

16. 2가지 가능성 vesicle : outside out, inside out, 

 - FCCP : Loch für proton. Proton channel, 

 - 어떤 Ca 트랜스포터가 atp 를 안쓰고 ...

23. abhängigkeit von Na+

 - 아주 전형적인 클래시컬한 실험이라네.

24. 이번엔 막 포텐셜 측정 : 이게 정확한 막 트랜스포트의 정보를 주지는 못한다. 

26. 여기서 widerstand : Bauteil, 즉 transporter, Capacity (Kontensator) : 막 그 자체. 건전지를 생각해보면 화학적 에너지를 가진 막들을 전해질 용액 사이에 담궈놔가 기본적으로 찌릿 빠워를 담아놓은것. 그러니까 막과 그 안과 밖, voltage source : 

U Spannung `= R Widerstand * A Stromfluss

27. R 의 변화는 기본적으로 Transporter 의 schließen / offen 이 영향, 

옴의 법칙을 이용해 볼트를 고정해놓고 현재의 전류를 측정함으로써 막 R 을 알아내고, 거이

28. 이걸 할 수 있을 정도로 큰 세포가 필요하다. 무슨 세포를 해야할 까? Xenopus oocytes

31. 무슨 문제가 있을까 이 테스트에는

 - 여튼 ㅎㅐ결책으로 

34. patch clamp technique

- 시작은 셀을 잡는걸로. 그리고 다양한 모드가 있다. 잡은거 사이로 fehler 가 있을수도 있으니까 높은전압

- outside out 하면 너무 작아서 카날이 한개만 들어있을지도, 

39. 앞의 멤브란 떼어서 실험한거와 비교하면 

 - single channel은 낮은 전압에도 반응이 있다.

 - 그러나 전체 셀로 하면 낮은 전압에서는 반응 자체가 없다. 

 - 38페이지의 체널이 하나씩 열리는 것과 비교하자면, 낮은 멤브란 슈파눙에서는 잘 안열리는데 높은 멤브란 슈파눙에서는 

 - 새로운 펙터 : 채널의 수, 그리고 열리는 성능 등이 추가된다구

41. 예시

43. 아주 훌륭한 interp 여튼 완전 물리화학적 method 와 완전 생물학적 뮤턴트 기술이 합친 좋은 사례

45. ER 처럼 패치클램프 테스트 못하는 경우에는 이렇게 새로 만드는 거다.


- r Überschuss : excess, overflow, surplus 과잉, 과도

- aequirin : 해파리 추출 형광단백질

- Fret : 두개의 형광물질이 가까운 거리에 있을 때 고영에 의해 에너지를 전달하는 현상, 즉 dependency on distance. CFP, YFP 이렇게 사용가능


05_Ions and metabolites in plants

2. 스트레스에 대한 칼슘 리엑션

5. farbstoff와 ca 의 상보작용인데 둘의 Verhältnis 로 

6. 인디케이터는 쌓여서 문제가 될 수 있는게 이 녀석이 카르복실그룹을 같고있어서

14. 에코린 Aequirin : 

20. 에코린 빛이 엄청 약한데 (한 유닛당 포톤 1개...) 이걸 Photomultiplier 이용해서 강화해서 봅니다

21. 이건 spatial 정보는 제공하지 않음으로,

23. 이것도 결국 다 장단이 있다

24. FRET assay : 이 반응 자체에는 Ca 이 전혀 참여하지 않는다 그러나 Calmodulin 의 등장이면 좀 다르다. 칼모둘린은 두 형광 단백질을 붙이는 역할인데 칼슘이 있어야 칼모듈린이 반응. 이걸 모티브로 칼슘 측정에 FRET 이 사용가능

33. 다른 원소 센서 : eCALwy sensor für Zn

36. Proton sensor : 

37. 다른 metabolite sensor ; Glutamat 센서


[시험준비 - 질문 리스트]

- Solute Transport in Plants - 

 1) Intro

4. How are those nutrient present in the soil?   5. What are the ion exchangers in the soil?

7. What about the anions?, other aninon?   10. 






















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